2018 Fiscal Year Research-status Report
DAA治療によるHCV排除後の肝細胞における、可逆的および不可逆的肝障害の解析
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17K09447
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
脇田 隆字 国立感染症研究所, 所長, 所長 (40280789)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | ＨＣＶ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ＨＣＶの治療効果はDAAにより飛躍的に高まった。ＨＣＶ排除の目的は慢性肝疾患と全身状態の改善と、肝発がん予防である。しかし、ＨＣＶの長期間にわたる持続感染による肝炎による細胞障害、組織障害の分子機構と治療によるその可逆性についてはよくわかっていない。本研究ではＨＣＶ感染モデルを用いて、ＨＣＶ感染肝障害の微細構造変化および遺伝子発現変化を解析し、DAA治療によるウイルス排除後の肝障害改善に資する基盤的研究を実施する。ウイルス培養系において、未感染細胞、感染細胞、排除後細胞を区別できる実験系を構築するためにスイッチング発現系を利用する。平成29年度にはRFP遺伝子の下流にGFP遺伝子を配置したレポーターカセット遺伝子をHuh751細胞に導入して選択培養とソーティングにより、約50％の細胞がRFP陽性となるHuh751-RG細胞株を樹立した。さらにCreを発現する組み換えHCV(HCV-Cre)を構築した。HCV-CreをHuh751-RG細胞に感染することにより遺伝子組み換えがおこり、GFP発現細胞を確認できた。今年度はHuh751-RG細胞をさらに単クローン化した。単クローン細胞ではすべての細胞でRFPを発現した。この単クローン細胞にHCV-Creを感染させると、様々な割合でGFP発現細胞が観察された。そこから、感染細胞あるいは非感染細胞に分離して培養を継続することにより、GFP発現細胞のみでHCV感染が確認され、RFP発現細胞では極めて低いHCV感染が確認できた。さらに、HCV感染した細胞を抗ウイルス薬で処理してHCVを排除した。薬物処理停止後2週間以上経過してもHCVは検出されなかった。以上の実験により、HCV未感染細胞、HCV感染細胞、HCV感染後排除細胞を樹立できた。次年度はこれらの細胞のオルガネラ変化、遺伝子およびタンパク発現変化について解析を進める。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
昨年度作成した細胞をさらに改良でき、未感染、感染、感染後の細胞を作成できた。来年度はこの細胞系の解析を進める
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| Strategy for Future Research Activity |
まず、HCV感染による肝細胞の微細構造変化を解析する。これまで、HCVキャリア患者の肝組織像を解析すると微細構造変化を観察したので、培養細胞で同様の現象を解析する．また、感染細胞をDAAで治療することによりウイルスを排除する。このウイルス排除細胞での細胞内微細構造変化の持続あるいは消失について検討する．これは臨床におけるSVR後の肝障害の持続やHCCの発症の基礎検討につながる。また、微細構造変化だけでなく、遺伝子発現プロファイルについても解析を実施する。
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| Causes of Carryover |
今年度は細胞のクローニング作業のため、遺伝子発現解析までいたらなかった。細胞は今年度完成したので来年度遺伝子発現などの解析作業に研究費を使用する予定
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[Presentation] Hepatitis C virus infection triggers the transactivation of aryl hydrocarbon receptor to rearrange hepatic lipid biosynthesis2018
Author(s)
Hirofumi Ohashi, Syo Nakajima, Sulyi Kim, Ryosuke Suzuki, Hideki Aizaki, Masayoshi Fukasawa, Shinji Kamisuki, Fumio Sugawara, Naoko Ohtani, Masamichi Muramatsu, Takaji Wakita, Koichi Watashi
Organizer
第66回日本ウイルス学会学術集会
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[Presentation] Abnormal hepatocellular organelles remain to be observed in sustained virological response (SVR) patients2018
Author(s)
Haruyo Aoyagi, Hiroko Iijima, Xin Zheng, Yu Ting Kao, Gewaid E. Hossam, Mami Matsuda, Koichi Watashi, Ryosuke Suzuki, Takahiro Masaki, Noritomo Shimada, Keizo Kato, Akihito Tsubota, Ayako Mimata, Yuriko Sakamaki, Shizuko Ichinose, Kenjiro Wake, Takaji Wakita, Hideki Aizaki.
Organizer
第66回日本ウイルス学会学術集会
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[Presentation] Aryl hydrocarbon receptor-cytochrome p450 1a1 pathway regulates hepatic lipid biosynthesis to maximize hepatitis C virus production2018
Author(s)
Hirofumi Ohashi, Syo Nakajima, Sulyi Kim, Ryosuke Suzuki, Hideki Aizaki, Masayoshi Fukasawa, Shinji Kamisuki, Kouji Kuramochi, Fumio Sugawara, Naoko Ohtani, Masamichi Muramatsu, Takaji Wakita, Koichi Watashi
Organizer
25th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
Int'l Joint Research
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[Presentation] Flavivirus subviral particles-based DNA vaccine induces neutralizing antibodies against HCV2018
Author(s)
Keigo Yato, Mami Matsuda, Noriyuki Watanabe, Shogo Nakajima, Akira Fujimoto, Koichi Watashi, Hideki Aizaki, Takanobu Kato, Koji Tamura, Masamichi Muramatsu, Takaji Wakita, Ryosuke Suzuki
Organizer
25th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
Int'l Joint Research
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[Presentation] Establishment of infectious genotype 4a HCVcc2018
Author(s)
Noriyuki Watanabe, Takaya Suzuki, Tomoko Date, Su Su Hmwe, Hussein H Aly, Hideki Aizaki, Masaya Sugiyama, Masashi Mizokami, Mohamed El Kassas, Ashraf Tabl, William IV Delaney, Guofeng Cheng, Masamichi Muramatsu, Takaji Wakita
Organizer
25th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
Int'l Joint Research
