2018 Fiscal Year Research-status Report

膵癌における早期エピゲノム診断を目指したマイクロRNA発現異常領域の同定

Research Project

Project/Area Number	17K09456
Research Institution	Kanazawa University
Principal Investigator	大坪公士郎金沢大学, 附属病院, 講師 (60361987)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	山下要金沢大学, 附属病院, 助教 (80456425) 三宅邦夫山梨大学, 大学院総合研究部, 准教授 (60550712)
Project Period (FY)	2017-04-01 – 2020-03-31
Keywords	miRNA / メチル化 / 胆汁 / 膵癌 / 胆道癌
Outline of Annual Research Achievements	本研究では、膵癌症例から内視鏡的に採取した膵癌組織、膵液，胆汁などの臨床サンプルを用いて、主に癌抑制型miRNAにおけるメチル化によるサイレンシングに関する検討を行い、早期膵癌においてメチル化されている癌抑制型miRNAを同定することにより、膵癌早期診断マーカーを確立することを目的とした。まず、胆汁を用いた検討を行った。当科にて内視鏡的逆行性胆管膵管造影 (ERCP) あるいは経皮経肝胆道ドレナージ (PTBD) 時に胆汁を採取した膵癌53例、胆道癌25例、良性膵胆道疾患20例、計98例を対象とした。胆汁からDNAを抽出し、sodium bisulfite処理後、癌抑制型miRNAと報告されている16個のmiRNA (miR-26a1, 29c, 30d, 31, 34bc, 96, 126, 130b, 145, 192, 200a, 200b, 345, 615-5p, 1247, 1254-1) においてPCRを施行し、次世代シーケンサーを用いてメチル化の頻度を定量的に解析した。 16個のmiRNAのうち、miR-1247, miR-200aでは膵癌、胆道癌において良性膵胆道疾患と比較して、miR-200bでは膵癌において良性膵胆道疾患と比較してメチル化が有意に多く認められた。一方、miR-126では良性膵胆道疾患において膵癌、胆道癌と比較してメチル化が有意に多く認められたが、他のmiRNAでは有意差は認められなかった。膵胆道疾患における胆汁中癌抑制型miRNAのメチル化の検討において、膵癌、胆道癌では良性膵胆道疾患と比較してmiR-1247, 200a, 200bのメチル化を有意に高率に認め、膵胆道疾患における良悪性の鑑別に有用なマーカーになる可能性が示唆された。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason まず、手術あるいは超音波内視鏡下穿刺術 (EUS-FNA) にて採取した膵癌組織を用いてmiRNAの発現、miRNAのメチル化について検討しようとしたが、RNA、DNAの抽出がうまくできなかった。そのため、膵癌、胆道癌、良性膵胆道疾患における胆汁を用いてDNA抽出を試みたところ、解析可能なDNAを抽出することができた。その後、既知の癌抑制型miRNAのメチル化を検討したが、良性膵胆道疾患と比較して膵癌において有意にメチル化されているmiRNAを同定することができず、他の癌抑制型miRNAを用いてメチル化を検討したところ、ようやくそれらのmiRNAを同定することができた。これらの作業に時間がかかったため、当初の計画よりも進行が遅れている。
Strategy for Future Research Activity	胆汁におけるmiRNAのメチル化については概ね解析が終わったため、今後RNAレベル、タンパクレベルでの発現状況についても確認したい。また、今後内視鏡的に採取した膵液や血液 (血清、血漿) を用いてmiRNAのメチル化に関する検討を行い、早期膵癌においてメチル化されているmiRNAを同定したい。さらに、膵液や血液 (血清、血漿) におけるタンパクレベル、RNAレベルでの発現状況についても確認したい。
Causes of Carryover	今年度の残額のみでは購入できない物品を次年度に購入予定であるため