2018 Fiscal Year Research-status Report
Development of RNA Interference targeting messenger RNAs involved in the invasiveness and metastasis of pancreatic cancer cells
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17K09463
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| Research Institution | Kochi University |
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Principal Investigator |
谷内 恵介 高知大学, 医学部附属病院, 特任准教授 (50626869)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
八幡 俊男 高知大学, 教育研究部医療学系臨床医学部門, 助教 (40380323)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 膵癌 / 核酸製剤 / siRNAデリバリーシステム |
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| Outline of Annual Research Achievements |
膵癌細胞に形成された葉状仮足（Lamellipodia）に運ばれる特定のメッセンジャーRNA (mRNA)が葉状仮足において局所翻訳されることにより、浸潤・転移が亢進する新しい機序を明らかにした。この機序に関わる19種類のmRNAを次世代シークエンサーにより網羅的に同定した。19種類のmRNAの葉状仮足における局所翻訳を抑制することができれば、膵癌細胞の浸潤を減少させ、遠隔転移を防ぐ可能性がある。本研究では、(1)膵癌細胞の浸潤・転移に関わっている19種類のmRNAを標的とするRNA干渉の一つであるsmall interfering RNA（siRNA）の同定、(2) 経静脈的に投与されたsiRNAを膵癌細胞まで効率よく輸送するために、膵癌細胞膜上に高発現している葉酸レセプターに結合する葉酸ナノ粒子を用いたsiRNAデリバリーシステムの開発を目的とする。
19種類のmRNAを標的とした葉酸-ポリエチレングリコール-陽イオン性ポリマーナノ粒子の付加された各siRNAを膵癌浸潤・転移マウスモデルに静注投与した。その結果、膵癌原発巣からの後腹膜浸潤と肺・肝臓への転移を抑制するsiRNAを同定することができた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
葉酸ナノ粒子を付加したsiRNAをヒト膵癌浸潤・転移モデルマウスに静脈注射により投与した。葉酸ナノ粒子付加siRNAが、マウス膵臓内に形成された膵癌組織に集積することをインビボイメージングシステムにより確認後、膵癌原発巣からの後腹膜浸潤と肺・肝臓転移を抑制する効果を病理組織学的に評価した。その結果、浸潤・転移抑制効果の強いsiRNA配列を抽出することにより、RNA干渉剤開発の基盤データを得ることができ、順調に研究計画を遂行できている。
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| Strategy for Future Research Activity |
マウスを用いた葉酸ナノ粒子付加siRNA の毒性試験を実施する：
10週齢マウスから全血採取する。血清を除去し、血球をPBSで希釈する。葉酸-ポリエチレングリコール-陽イオン性ポリマーナノ粒子のみ、および葉酸-ポリエチレングリコール-陽イオン性ポリマーナノ粒子を付加したスクランブルコントロールsiRNAをそれぞれPBSで希釈したマウス血球に添加し、37℃で1時間インキュベートする。用いるナノ粒子の投与量を1mg/mLから10mg/mLの範囲で割り振る。OD測定を行い、赤血球溶血の有無を検討する。
次に、６週齢ヌードマウスを用いた毒性試験を行う。葉酸-ポリエチレングリコール-陽イオン性ポリマーナノ粒子のみ、および葉酸-ポリエチレングリコール-陽イオン性ポリマーナノ粒子を付加したスクランブルコントロールsiRNAの経静脈投与を1回/週の頻度で6週間行った後、全マウスから全血採取する。各群5匹にて実施する。血清を分離し、外注検査（和光）に提出する。肝・腎・膵機能検査を行い、PBSのみを投与したコントロール群（ヌードマウス5匹）と比較を行い、肝・腎・膵に機能異常が生じていないかを検討する。さらに、全血採取後にマウス重要臓器（脳・肺・肝臓・膵臓・腎臓・骨髄）を摘出し、ホルマリン固定する。ヘマトキシリン＆エオジン染色を行い、組織標本を作成する。重要臓器に病理組織学的に異常がないかを調べる。
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Research Products
(22 results)
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[Presentation] 当院における膵管狭窄に対する軟性生検鉗子の使用経験.2018
Author(s)
耕崎拓大,木岐淳,吉岡玲子,谷内恵介,小野正文,西原利治,藤澤和音,上村直,北川博之,花崎和弘,弘井誠.
Organizer
第104回日本消化器病学会総会
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[Presentation] 当院での胆膵癌に対する術前化学療法後の切除症例の検討.2018
Author(s)
耕崎拓大,木岐淳,吉岡玲子,坪井麻記子,谷内恵介,小野正文,西原利治,津田祥,藤澤和音,上村直,花崎和弘,弘井誠.
Organizer
第109回日本消化器病学会四国支部例会 第120回日本消化器内視鏡学会四国支部例会
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[Presentation] 動注療法が有用であったCT grade 3の特発性重症急性膵炎の1例.2018
Author(s)
村田紘子,耕﨑拓大,吉岡玲子,坪井麻記子,木岐淳,谷内恵介,小野正文,西原利治,梶原賢司,南口博紀,山上卓士,津田祥,藤澤和音,上村直,花崎和弘,長野修.
Organizer
第109回日本消化器病学会四国支部例会
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[Presentation] 化膿性膵管炎を併発した主膵管型膵管乳頭粘液性腫瘍の1例.2018
Author(s)
山本翔太,耕﨑拓大,吉岡玲子,坪井麻記子,木岐淳,谷内恵介,小野正文,西原利治,津田祥,藤澤和音,上村直,花崎和弘,弘井誠.
Organizer
第120回日本消化器内視鏡学会四国支部例会
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[Presentation] 動注療法が有用であった突発性重症急性膵炎の１例.2018
Author(s)
村田紘子,耕﨑拓大,吉岡玲子,坪井麻記子,木岐淳,谷内恵介,梶原賢司,南口博紀,山上卓士,津田祥,藤澤和音,上村直,花崎和弘,長野修,西原利治.
Organizer
第27回消化器疾患病態治療研究会
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