2019 Fiscal Year Annual Research Report
The role of protein kinase N in cardiomyocyte
| Project/Area Number |
17K09571
|
|---|
| Research Institution | Nagoya University |
|---|
Principal Investigator |
竹藤 幹人 名古屋大学, 医学系研究科, 助教 (20709117)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
天野 睦紀 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (90304170)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
|
| Keywords | 心不全 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
2019年度は下記研究を行った。
動物実験:Tamoxifen誘導性心筋特異的PKN1, PKN2欠損(cmc-PKN1/2 DKO)マウスを作製し、その単離した心筋細胞でウエスタンブロットを行うことでPKN1, PKN2が発現していないことを確認した。コントロールマウスとcmc-PKN1/2 DKOマウスにTACを行い、4週間後に評価を行うと、コントロールマウスでは心重量の増加を認めたが、cmc-PKN1/2 DKOマウスではその増加の抑制を認めた。心臓エコー検査において、cmc-PKN1/2 DKOマウスではコントロールマウスと比較してTACによる心収縮能の低下や左室重量の増加を抑制していた。TACによる心筋細胞の肥大と線維化をcmc-PKN1/2 DKOマウスでは抑制していた。TAC8週後、12週後で心収縮能低下と心拡大をcmc-PKN1/2 DKOマウスでは抑制していた。
生化学実験:PKNの活性化と心肥大・線維化の機序を明らかにするために、転写因子であるSRF、その共役因子であるMRTFAに着目した。MRTFAのアクチン結合部位であるN末にGSTタグを付けたタンパク(GST-MRTFA-NT)を作成し、GST-PKN-catを添加するとGST-PKN-catで有意にリン酸化され、また有意にMRTFAとアクチンの結合を抑制した。PKNによるMRTFAのリン酸化を評価するために、抗pSer51 MRTFA抗体と抗pThr57 MRTFA抗体を作成した。TAC5日後のマウスの心臓でMRTFA Ser51とThr57のリン酸化を調べた。TAC5日後のcmc-PKN1/2wt/wtマウスの心臓においてMRTFA Ser51とThr57のリン酸化が示され、cmc-PKN1/2 DKOマウスではそのリン酸化が抑制されていた。
|
-
[Journal Article] Protein Kinase N Promotes Stress-Induced Cardiac Dysfunction Through Phosphorylation of Myocardin-Related Transcription Factor A and Disruption of Its Interaction With Actin.2019
Author(s)
Sakaguchi T, Takefuji M, Wettschureck N, Hamaguchi T, Amano M, Kato K, Tsuda T, Eguchi S, Ishihama S, Mori Y, Yura Y, Yoshida T, Unno K, Okumura T, Ishii H, Shimizu Y, Bando YK, Ohashi K, Ouchi N, Enomoto A, Offermanns S, Kaibuchi K, Murohara T.
-
Journal Title
Circulation
Volume: 140
Pages: 1737-1752
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
[Journal Article] Cardiomyocytes capture stem cell-derived, anti-apoptotic microRNA-214 via clathrin-mediated endocytosis in acute myocardial infarction.2019
Author(s)
Eguchi S, Takefuji M, Sakaguchi T, Ishihama S, Mori Y, Tsuda T, Takikawa T, Yoshida T, Ohashi K, Shimizu Y, Hayashida R, Kondo K, Bando YK, Ouchi N, Murohara T.
-
Journal Title
J Biol Chem.
Volume: 294
Pages: 11665-11674
DOI
Peer Reviewed / Open Access
