肺障害・肺線維化における血管内皮細胞と線維芽細胞の相互作用

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K09609
• Research Institution: Hamamatsu University School of Medicine
• Principal Investigator: 乾 直輝 浜松医科大学, 医学部, 准教授 (80402254)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 須田 隆文 浜松医科大学, 医学部, 教授 (30291397)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 肺線維化

Outline of Annual Research Achievements

肺線維症は肺の線維化を主体とする難治性，進行性の致死的疾患で，発症や進展機序の更なる解明が望まれている。現在のところ，何らかの刺激によって上皮障害が惹起され，続いて線維芽細胞が活性化して異常な組織修復として線維化が進展すると考えられている。本研究では，肺線維化形成過程における内皮細胞の機能に着目し、エアロゾル化ブレオマイシン肺線維化モデルを作成し、線維化肺組織より回収した肺血管内皮細胞を用いて，①肺線維化過程における内皮細胞機能を検討する。当該年度においては、C57BL/6マウスにエアロゾル化したブレオマイシンを経気道的に注入し、ブレオマイシン誘導性肺線維化モデルマウスを作成した。投与７、14、21、28日後にそれぞれ肺組織を回収し、HE染色およびトリクローム染色で肺組織を病理学的に検討したところ、細胞浸潤は投与後7日で観察され、線維化はブレオマイシン投与21日後で著明であった。これら組織学的変化はびまん性に生じており、エアゾル化ブレオマイシン投与によって肺線維症モデルが形成可能なことが確認された。線維化の形成は、気管支肺胞洗浄の細胞解析やヒドロキシプロリン測定にても確認された。続いて同組織より血管内皮細胞、線維芽細胞の分離を試みた。研究計画にそった方法で抗体を用いて高純度の血管内皮細胞の分離が可能であった。この細胞よりRNAを抽出しRT-PCRを実施、線維化メディエーターや炎症性サイトカインの発現を確認した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ブレオマイシン誘導性肺線維化モデルマウス作成と肺血管内皮細胞の機能解析は当初の予定通りである。

Strategy for Future Research Activity

今後の研究課題として、線維芽細胞の共培養条件設定がある。培地、添加物質の検討により最適な条件を設定し、研究計画に沿って、順次研究を推進する予定である。

Causes of Carryover

研究開始直後は血管内皮の単離が順調に進まず、少数サンプルを用いた条件設定を中心としたため、使用マウス数ならびに単離のための試薬、単離細胞を用いた検討の施行数が予定より少なくなり、当該助成金が生じた。すでに条件設定が完了したため、３１年度は実験施行数が多くなることが予定され、実験試薬等の消耗が多くなると予想される。