結核菌のハイブリッドエピトープ長鎖ペプチドを用いた新規ナノ粒子ワクチンの開発

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K09650
• Research Institution: Hamamatsu University School of Medicine
• Principal Investigator: 榎本 紀之 浜松医科大学, 医学部附属病院, 講師 (50436961)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 須田 隆文 浜松医科大学, 医学部, 教授 (30291397) ; 永田 年 浜松医科大学, 医学部, 教授 (90275024)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 細胞障害性T細胞 / 樹状細胞 / クロスプレゼンテーション / ナノ粒子

Outline of Annual Research Achievements

卵白アルブミン(OVA)特異的な細胞障害性T細胞(CTL)エピトープおよびヘルパーT細胞(Th)エピトープを用いてin vitroにおける細胞増殖性試験を実施した。OVAのCTLエピトープ特異的なT細胞レセプターを持つマウスOT-1細胞およびThエピトープ特異的なT細胞レセプターを持つOT-2細胞を等量混合し、さらにエピトープをパルスしたマウス骨髄由来の樹状細胞(BMDC)を共培養した。エピトープとして、生分解性ナノ粒子（polylactic coglycolic acid: PLGA）によりコートされたCTLエピトープを作成しBMDCへパルスしたところ、CTLエピトープ単独群と比較して高いOT-1細胞の細胞増殖能を確認した。また、CTLおよびThエピトープを連結したハイブリッドエピトープ長鎖ペプチド(H/K-HELP: helper/killer-hybrid epitope long peptide) をBMDCへパルスしたところ、各エピトープのパルス群と比較して、高いOT-1細胞の増殖能を確認した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

PLGAによるクロスプレゼンテーション能の増強効果およびH/K-HELPとTh細胞を用いたCTL増殖能の増強効果をin vitroにおいて確認できた。

Strategy for Future Research Activity

今後は以下に記載の研究項目に沿って研究を実施する予定である。

①PLGAによりコートされたCTLエピトープを作成し、BMDCへパルスする。このBMDCをマウスへ静注あるいは皮下注し、OVA特異的なCTLの誘導能をテトラマーおよびリンパ球増殖試験、インターフェロンγ産生量などにより確認する。
②OVAと比較し抗原性の高いリステリア菌のCTLエピトープを利用する。上記①の実験と同様に、PLGAによりコートされたCTLエピトープを作成し、BMDCへパルスする。このBMDCをマウスへ静注あるいは皮下注し、OVA特異的なCTLの誘導能をテトラマーおよびリンパ球増殖試験、インターフェロンγ産生量などにより確認する。

Causes of Carryover

上記の研究計画の実施に当たり、マウス骨髄由来樹状細胞(DC)を作成するためwild typeのC57/BL6マウスを購入する必要がある。また、DC作成、培養のためにサイトカイン(GM-CSF, IL-4)やFCSも購入する必要がある。さらにナノ粒子(PLGA)や細胞障害性T細胞を定量するテトラマー、およびリンパ球増殖試験用のCFSE、フローサイトメトリー用の各種抗体なども購入予定である。