2018 Fiscal Year Research-status Report
先天性腎尿路異常の新規原因遺伝子CBWD1の細胞内での役割
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17K09689
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
神田 祥一郎 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (60632651)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 先天性腎尿路異常 / 腎臓発生 / GATA3 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成30年度は細胞内でのCBWD1の役割についてin vitro解析を行った。CBWD1と同様に尿管芽の細胞核内に発現し、KOマウスが同じような表現型（CAKUT：水腎症、重複尿管）を呈する遺伝子であるGATA3に注目し、両者の相互作用を解析した。
①CBWD1とGATA3の共局在：マウス胎仔腎切片を用いて免疫染色を行い、両者が尿管芽細胞核内に共局在することを確認した。 ②CBWD1とGATA3の結合：HEK293T細胞を用いて両者を強制発現し、免疫沈降法により両者の結合を確認した。次にGST-CBWD1タンパクを作成・精製し、GATA3との結合をGSTプルダウン法にて証明した。 ③CBWD1のGATA3機能への影響：GATA3は転写因子であるため、その活性にCBWD1が影響を与える可能性を考えルシフェラーゼアッセイを行ったところ、CBWD1を用いることでGATA3活性が増加することが分かった。
以上よりCBWD1はGATA3の機能を修飾する作用があることが明らかとなった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
CBWD1の細胞内での役割について、蛋白の発現、結合、活性への影響とメカニズムが明らかとなったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成31年度はこれまでの結果を論文化することを目指す。
CBWD1の下流遺伝子をRNA-seqを行い明らかにする。
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| Causes of Carryover |
in vitro実験が想定よりも早く進んでいるため。
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[Journal Article] Clinically diverse phenotypes and genotypes of patients with branchio-oto-renal syndrome.2018
Author(s)
Unzaki A, Morisada N, Nozu K, Ye MJ, Ito S, Matsunaga T, Ishikura K, Ina S, Nagatani K, Okamoto T, Inaba Y, Ito N, Igarashi T, Kanda S, Ito K, Omune K, Iwaki T, Ueno K, Yahata M, Ohtsuka Y, Nishi E, Takahashi N, Ishikawa T, Goto S, Okamoto N, Iijima K
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Journal Title
J Hum Genet
Volume: 63
Pages: 647-656
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Amnionless-mediated glycosylation is crucial for cell surface targeting of cubilin in renal and intestinal cells.2018
Author(s)
Udagawa T, Harita Y, Miura K, Mitsui J, Ode KL, Morishita S, Urae S, Kanda S, Kajiho Y, Tsurumi H, Ueda HR, Tsuji S, Saito A, Oka A
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Journal Title
Sci Rep
Volume: 8
Pages: 2351
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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