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2018 Fiscal Year Research-status Report

TDP-43選択的スプライシングによる ALS病態機序とバイオマーカー利用の検討

Research Project

Project/Area Number 17K09750
Research InstitutionNiigata University

Principal Investigator

石原 智彦  新潟大学, 脳研究所, 助教 (70612232)

Project Period (FY) 2017-04-01 – 2020-03-31
KeywordsALS / TDP-43 / 選択的スプライシング
Outline of Annual Research Achievements

当初の予定通り,初年度に 1) 剖検組織でのTDP-43 mRNA の選択的スプライシング(AS)多様性の確認,定量,2) 組織中でのTDP-43 mRNA ASに関与する 因子の解析を行った.本年度は 1) AS-mRNA由来のC末端変異型TDP-43蛋白(vTDP-43)の生化学的解析と2) 罹患組織でのvTDP-43 蛋白の局在確認を行った.
野生型TDP-43 cDNAを鋳型にvTDP-43 発現プラスミドを作成し,Lipofectamine 2000 (Invitrogen)を用いて,HEK293T細胞に発現実験を行った.72時間後に細胞を回収し,RIPA,Urea buffer 可溶性分画をそれぞれ回収し,TDP-43 N-末抗体を一次抗体としてウエスタンブロットを行った,野生型TDP-43発現細胞と比較して,vTDP-43 発現細胞では有意に Urea分画で多く発現蛋白質が検出された.また免疫染色では,vTDP-43発現細胞での凝集体形成が確認された.この結果から,vTDP-43蛋白の不溶性,凝集性が確認された.
またvTDP-43 特異的抗体を作成し,筋萎縮性側索硬化症(ALS)罹患組織である腰髄組織にて免疫染色を実施した.その結果,一部の残存運動神経細胞に,vTDP-43特異的抗体で認識される封入体を確認し得た.これらの結果より,vTDP-43 蛋白質がALS病態に関与している事が示唆された.

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初計画した予定に準じ,TDP-43 AS mRNA由来の変異型TDP-43蛋白質機能解析を行えている.

Strategy for Future Research Activity

当初の予定どおり,次年度はリキッドバイオプシー解析を行う.

Causes of Carryover

予定した研究が順調に進行したため,使用予算が当初見込みより減額された.
次年度も当初計画の予定に準じ,解析を進めていく.

  • Research Products

    (3 results)

All 2018

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (2 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results)

  • [Journal Article] The Japanese Early-Stage Trial of High-Dose Methylcobalamin for Amyotrophic Lateral Sclerosis (JETALS): Protocol for a Randomized Controlled Trial2018

    • Author(s)
      Oki Ryosuke、Izumi Yuishin、Nodera Hiroyuki、Ishihara Tomohiko,Kaji Ryuji、JETALS et al.
    • Journal Title

      JMIR Research Protocols

      Volume: 7 Pages: e12046~e12046

    • DOI

      10.2196/12046

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] The SMN2 gene copy number states can affect the onset risk and survival time in Japanese ALS.2018

    • Author(s)
      Tomohiko Ishihara
    • Organizer
      PACTALS 2018
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Efficacy evaluation of nusinersen in an adult spinal muscular atrophy case using peripheral blood mRNA.2018

    • Author(s)
      Tomohiko Ishihara
    • Organizer
      29th international symposium on ALS/MND,
    • Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2019-12-27  

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