Therapeutic application of BOECs in von Willebrand disease

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K09902
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 松下 正 名古屋大学, 医学部附属病院, 教授 (30314008)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鈴木 伸明 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (70637686)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 輸血学 / 血栓止血学 / von Willebrand因子 / von Willebrand病 / 血友病 / GPIb / 血小板

Outline of Annual Research Achievements

30年度は、29年度に引き続き、9例のVWD患者より採取した末梢血ゲノムDNAを用いてエクソーム解析を実施し、以下の変異を同定した。
c.1966C>T（p.Gln656*、新規変異）、c.3916C>T（p.Arg1306Trp、既報）、c.4975C>T（p.Arg1659*、既報）、
c.4183C>T（p.Arg1395Trp、新規変異）、c.5471delC（p.Pro1824fs、新規変異）、c.4121G>A（p.Arg1374His、既報）、c.4414G>C（p.Asp1472His、既報）、c.3943C>T（p.Arg1315Cys、既報）
これらの結果についてはサンガーシークエンスでも確認作業中である。解析した症例の中にはミスセンス変異でありながら、type 3（重症型）の表現型（臨床症状）を示し、血液中にVWF抗原、活性が検出できない症例がある。これらの症例を中心にその病因を探るべく、末梢血中の遊離血管内皮前駆細胞を培養して得られる血管内皮細胞(BOECs)による病態解析を進めた。まずは健常人の検体を用いて、BOECsの安定的培養条件の設定とVWFによる免疫染色の至適条件の設定を行った。BOECsの培養条件については様々な試行錯誤を繰り返しているところであるが、症例によりBOECsの培養ができない症例がある事を見いだし、その原因（背景）について探索中を継続する。VWFの免疫染色についてはHUVECを用いて条件設定を行ったのち、作成したBOECsに対しても実施し、安定的な結果が得られている。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

予定よりもやや遅れは認められるが、新規変異が複数同定され、遺伝子レベルでの新たな知見が得られた。BOECsを用いた病態解析についても課題が明確になってきており、研究の完遂は十分可能であると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

病態解析の一環として、作成したBOECsに対しDDAVP添加試験を行いVWF放出能の検討を実施した。目下DDAVPの至適濃度設定を行っている段階であるが、今後の結果によってはVWD病態解析の有用なツールとなる可能性を秘めている。

Causes of Carryover

今年度物品費が節約できたので残額は次年度の細胞培養試薬購入（引き続きBOECsの培養を行う）のために使用予定である。

Research Products

• [Journal Article] Inhibitor development, safety, and efficacy of Advate in previously untreated patients with hemophilia A in a postmarketing surveillance in Japan. (2019)
  • Author(s): Taki M, Fukutake K, Matsushita T, Nogami K, Shima M, Yoshioka A, Takamatsu J, Arai M, Takagi H, Uchikawa H, Engl W, Shirahata A.
  • Journal Title: Int J Hematol. Volume: 109(1) Pages: 70-78
  • DOI: 10.1007/s12185-018-2499-y.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Correction to: Inhibitor development, safety, and efficacy of Advate in previously untreated patients with hemophilia A in a postmarketing surveillance in Japan. (2019)
  • Author(s): Taki M, Fukutake K, Matsushita T, Nogami K, Shima M, Yoshioka A, Takamatsu J, Arai M, Takagi H, Uchikawa H, Engl W, Shirahata A.
  • Journal Title: Int J Hematol. Volume: - Pages: -
  • DOI: 10.1007/s12185-018-02564-z.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Clot waveform analysis in Clauss fibrinogen assay contributes to classification of fibrinogen disorders. (2019)
  • Author(s): Suzuki A, Suzuki N, Kanematsu T, Shinohara S, Arai N, Kikuchi R, Matsushita T.
  • Journal Title: Thromb Res. Volume: - Pages: -
  • DOI: 10.1016/j.thromres.2018.12.018.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Inhibitor development, safety and efficacy of Advate among previously treated patients with hemophilia A in a postmarketing surveillance in Japan. (2019)
  • Author(s): Fukutake K, Taki M, Matsushita T, Nogami K, Shima M, Yoshioka A, Takamatsu J, Uchikawa H, Takagi H, Arai M, Engl W, Shirahata A.
  • Journal Title: Int J Hematol. Volume: - Pages: -
  • DOI: 10.1007/s12185-018-02574-x.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Vwf K1362A resulted in failure of protein synthesis in mice. (2018)
  • Author(s): Sanda N, Suzuki N, Suzuki A, Kanematsu T, Kishimoto M, Hasuwa H, Takagi A, Kojima T, Matsushita T, Nakamura S.
  • Journal Title: Int J Hematol. Volume: 107(4) Pages: 428-435
  • DOI: 10.1007/s12185-017-2394-y.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Perioperative safety and hemostatic efficacy of Advate in patients with hemophilia A in a postmarketing surveillance in Japan. (2018)
  • Author(s): Nogami K, Takedani H, Shima M, Yoshioka A, Matsushita T, Takamatsu J, Taki M, Fukutake K, Uchikawa H, Takagi H, Arai M, Engl W, Shirahata A.
  • Journal Title: Int J Hematol. Volume: 108(1) Pages: 22-29
  • DOI: 10.1007/s12185-018-2434-2.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Once-weekly prophylaxis with 40 IU/kg nonacog beta pegol (N9-GP) achieves trough levels of >15% in patients with haemophilia B: Pooled data from the paradigm trials. (2018)
  • Author(s): Oldenburg J, Carcao M, Lentz SR, Mahlangu J, Mancuso ME, Matsushita T, Negrier C, Clausen WHO, Ehrenforth S, Young G.
  • Journal Title: Haemophilia. Volume: 24(6) Pages: 911-920
  • DOI: 10.1111/hae.13608.
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] von Willebrand病の診断と治療 (2018)
  • Author(s): 松下正
  • Journal Title: 日本内科学会雑誌 Volume: 107(9) Pages: 1844-1851
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] F8 Inv22を含む複雑な変異を同定した重症血友病A症例の遺伝学的変異アレル由来の検索 (2018)
  • Author(s): 垣原 美紗樹, 田村 彰吾, 服部 有那, 高木 夕希, 鈴木 幸子, 橋本 恵梨華, 坂根 寛人, 大平 晃也, 所 真昼, 高木 明, 小川 実加, 兼松 毅, 鈴木 伸明, 松下 正, 小嶋 哲人
  • Organizer: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [Presentation] 第I/II相及び第III相試験におけるエミシズマブ投与下血友病A患者の手術経験 (2018)
  • Author(s): 松下 正, Kruse-Jarres Rebecca, Croteau Stacy E., Khoo Liane, Chang Tiffany, Dhalluin Christophe, Xu Jin, Devenport Jenny, Ko Richard H., Solari Paul, 葛西 隆, 大塚 渉, Callaghan Michael U., 嶋 緑倫
  • Organizer: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [Presentation] 血友病Aにおいて関節症の進行抑制には出血抑制よりも高いFVIII活性が必要である (2018)
  • Author(s): 鈴木 伸明, 鈴木 敦夫, 高橋 伸典, 田村 彰吾, 兼松 毅, 高木 明, 小嶋 俊久, 清井 仁, 小嶋 哲人, 石黒 直樹, 松下 正
  • Organizer: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [Presentation] 血液凝固第V因子欠乏症を合併する血友病A症例(第2報) 凝血学的評価 (2018)
  • Author(s): 鈴木 幸子, 高木 夕希, 坂根 寛人, 橋本 恵梨華, 垣原 美紗樹, 服部 有那, 大平 晃也, 所 真昼, 田村 彰吾, 高木 明, 鈴木 敦夫, 鈴木 伸明, 松下 正, 山崎 鶴夫, 小嶋 哲人
  • Organizer: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [Presentation] 凝固一段法と合成基質法による第VIII因子活性測定において乖離を示した血友病A症例 (2018)
  • Author(s): 鈴木 敦夫, 鈴木 伸明, 兼松 毅, 岸本 磨由子, 田村 彰吾, 高木 明, 川上 萌, 梶浦 容子, 小嶋 哲人, 松下 正
  • Organizer: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [Presentation] アンケートで示唆されたエミシズマブ投与によるインヒビター保有血友病Aの出血と日常生活の変化 (2018)
  • Author(s): 嶋 緑倫, 鈴木 隆史, 瀧 正志, 松下 正, 佐藤 哲司, 福武 勝幸, 葛西 隆, 岡田 法大, 米沢 慎吾, 野上 恵嗣
  • Organizer: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [Presentation] VWF K1362Aノックインマウスの解析 (2018)
  • Author(s): 三田 直美, 鈴木 伸明, 鈴木 敦夫, 兼松 毅, 岸本 磨由子, 高木 明, 小嶋 哲人, 松下 正, 中村 栄男
  • Organizer: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [Presentation] GPIb変異体を用いたVWF活性とリストセチンコファクター活性の比較検討 (2018)
  • Author(s): 川上 萌, 鈴木 敦夫, 鈴木 伸明, 兼松 毅, 岸本 磨由子, 篠原 翔, 新井 信夫, 梶浦 容子, 松下 正
  • Organizer: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [Presentation] 凝固波形解析を利用した新しい異常フィブリノゲン血症検出法 (2018)
  • Author(s): 鈴木 敦夫, 篠原 翔, 新井 信夫, 兼松 毅, 鈴木 伸明, 安藤 善孝, 松下 正
  • Organizer: 第19回日本検査血液学会学術集会
• [Presentation] インヒビター非保有血友病Aに対するエミシズマブ HAVEN3試験結果(Emicizumab in persons with hemophilia A(PwHA) without inhibitors: Results from HAVEN 3 study) (2018)
  • Author(s): 嶋 緑倫, Mahlangu Johnny, Oldenburg Johannes, 鈴木 隆史,西田 恭治, 松下 正, 伊藤 俊広, 瀧 正志, 福武 勝幸, Paz-Priel Ido, Negrier Claude, Niggli Markus, Mancuso Maria Elisa, Schmitt Christophe,他12名
  • Organizer: 第80回日本血液学会学術集会
• [Presentation] 血栓症を伴う新規変異を含む異常フィブリノゲン血症の分子遺伝学的解析(Molecular genetic analysis of dysfibrinogenemia including novel mutations with thrombosis) (2018)
  • Author(s): 服部 有那, 高木 夕希, 田村 彰吾, 垣原 美紗樹, 鈴木 幸子, 大平 晃也, 所 真昼, 早川 文彦, 兼松 毅, 鈴木 伸明, 松下 正, 小嶋 哲人
  • Organizer: 第80回日本血液学会学術集会
• [Presentation] von Willebrand病の診断と治療 (2018)
  • Author(s): 松下正
  • Organizer: 第115回日本内科学会総会・講演会・教育講演
• [Presentation] 「血栓止血学の温故知新―炎症・止血・創傷治癒におけるクロスストーク―」一次止血機構の病態生理 (2018)
  • Author(s): 松下正
  • Organizer: 第40回日本血栓止血学会学術集会ＣＳＬベーリングスポンサードシンポジウム