2019 Fiscal Year Annual Research Report
Therapeutic application of BOECs in von Willebrand disease
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17K09902
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
松下 正 名古屋大学, 医学部附属病院, 教授 (30314008)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 伸明 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (70637686)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 血栓止血学 / von Willebrand因子 / BOEC / von Willebrand病 / multimer / Weibel-Palade body / DDAVP |
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| Outline of Annual Research Achievements |
令和元年度は実際の患者の末梢血から採取した血管内皮前駆細胞（EPCs）を培養して得られる血管内皮細胞（BOECs、現在はendothelial colony forming cells (ECFC)と呼ばれることが多い）を用い、VWF発現の影響を調査して分子病態解析を行った。
培養方法：患者末梢静脈血約60mlを採取→遠心分離した単核球層を1型コラーゲンをコートした6-wellプレート上に、4x107 MNC/wellとなるようresuspendし、EGM-2メディウム下にてⅠ型collagenコート6 well plateに播種、37℃ 5%CO2下で培養を行った。
結果：健康成人コントロール2例、患者10例中5例で最初の培養過程で細胞は典型的なcobblestone形態をとった。フローサイトメトリーにて細胞はCD31(+) VEGFR-2(+) CD14(-) CD45(-) CD133(-) CD34(-)であった。陽性コントロールにはHUVECを用いた。VWFの細胞学的な発現様式はconfocal immunofluorescence (IF)にて観察した。固定後FITC標識抗体を用いて蛍光染色を行い、M0616(抗VWF)による染色は良好で、phalloidin555(f-actin)との二重染色にて細胞骨格蛋白とは共在しないVWFの発現を認めた。
健常人由来ECFCにて、100-150ng/mlのVWFの分泌を培養上清中に認めたが、type 1、type 3と考えられる症例では全く発現は見られなかった。VWF:Ag、VWF:RCoともに検出感度以下の臨床的にtype 3と考えられる症例では全く発現は見られなかったが、同様な検査結果を示す臨床的に重症な type 1と考えられる症例において培養開始Day34においてVWF陽性細胞が少数確認された。観察を行った細胞はLysateを調整し、Western blottingにてVWFのプロセシングを確認中である。
本法の免疫染色により、type 1とtype 3の鑑別において小胞体(細胞内Dimer形成場所)やGolgi体(細胞内Multimer形成)と共染色することでVWFの存在様式を推定することが可能であった。
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[Journal Article] A Japanese multi-institutional collaborative study of antigen-positive red blood cell (RBC) transfusions in patients with corresponding RBC antibodies.2020
Author(s)
Yamada C, Takeshita A, Ohto H, Ishimaru K, Kawabata K, Nomaguchi Y, Haraguchi Y, Abe M, Sobue K, Takenouchi H, Takadate J, Kamimura M, Katai A, Kasai D, Minami Y, Sugimoto T, Michino J, Nagai K, Kumagai M, Hasegawa Y, Ishizuka K, Ohtomo N, Yamada N, Muroi K, Matsushita T, Takahashi K.
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Journal Title
Vox Sang.
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Higher FVIII:C measured by chromogenic substrate assay than by one-stage assay is associated with silent hemophilic arthropathy.2020
Author(s)
Ogawa M, Suzuki N, Takahashi N, Tamura S, Suzuki A, Suzuki S, Hattori Y, Kakihara M, Kanematsu T, Kojima T, Katsumi A, Hayakawa F, Kojima T, Ishiguro N, Kiyoi H, Matsushita T.
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Journal Title
Thromb Res.
Volume: 188
Pages: 103-105
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Successful Perioperative Combination of High-Dose FVIII Therapy Followed by Emicizumab in a Patient with Hemophilia A with Inhibitors.2019
Author(s)
Okamoto S, Suzuki N, Suzuki A, Suzuki S, Tamura S, Suzuki M, Takahashi N, Kojima T, Kanematsu T, Kojima T, Kiyoi H, Ishiguro N, Matsushita T.
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Journal Title
TH Open.
Volume: 3(4)
Pages: e364-e366
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Subcutaneous concizumab prophylaxis inhemophilia A and hemophilia A/B with inhibitors: Phase 2 trial results.2019
Author(s)
Shapiro AD, Angchaisuksiri P, Astermark J, Benson G, Castaman G, Chowdary P,Eichler H, Jimenez-Yuste V, Kavakli K, Matsushita T, Poulsen LH MS, Wheeler AP,Young G, Zupancic-Salek S, Oldenburg J.
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Journal Title
Blood
Volume: 134(22)
Pages: 1973-1982
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Apolipoprotein E binds to and reduces serum levels of DNA-mimicking, pyrrolated proteins.2019
Author(s)
Hirose S, Hioki Y, Miyashita H, Hirade N, Yoshitake J, Shibata T, Kikuchi R, Matsushita T, Chikazawa M, Itakura M, Zhang M, Nagata K, Uchida K.
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Journal Title
J Biol Chem.
Volume: 294(28)
Pages: 11035-11045
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Apparent synonymous mutation F9 c.87A>G causes secretion failure by in-frame mutation with aberrant splicing.2019
Author(s)
Odaira K, Tamura S, Suzuki N, Kakihara M, Hattori Y, Tokoro M, Suzuki S, Takagi A, Katsumi A, Hayakawa F, Okamoto S, Suzuki A, Kanematsu T, Matsushita T, Kojima T.
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Journal Title
Thromb Res.
Volume: 179
Pages: 95-103
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Molecular basis of SERPINC1 mutations in Japanese patients with antithrombin deficiency.2019
Author(s)
Tamura S, Hashimoto E, Suzuki N, Kakihara M, Odaira K, Hattori Y, Tokoro M, Suzuki S, Takagi A, Katsumi A, Hayakawa F, Suzuki A, Okamoto S, Kanematsu T, Matsushita T, Kojima T.
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Journal Title
Thromb Res.
Volume: 178
Pages: 159-170
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Factor VIII: Long-established role in haemophilia A and emerging evidence beyond haemostasis.2019
Author(s)
Samuelson Bannow B, Recht M, Negrier C, Hermans C, Berntorp E, Eichler H, Mancuso ME, Klamroth R, O'Hara J, Santagostino E, Matsushita T, Kessler C.
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Journal Title
Blood Rev.
Volume: 35
Pages: 43-50
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] 血友病Aに対するrVIII-SingleChain 第I/III相臨床試験における日本人患者サブ解析2019
Author(s)
日笠 聡, 長尾 梓, 福武 勝幸, 松下 正, 鈴木 伸明, 山本 晃士, 嶋 緑倫, 野上 恵嗣, 佐藤 哲司, 康 勝好, 脇 研自, 藤原 充弘, 佐藤 直仁, 古林 みどり, 桑原 光弘
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Journal Title
日本血栓止血学会誌
Volume: 30巻4号
Pages: 625-631
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Subcutaneous prophylaxis with the anti-TFPI monoclonal antibody concizumab in haemophilia A and haemophilia A/B with inhibitors: Phase 2 trial results2019
Author(s)
Jan Astermark, Pantep Angchaisuksiri, Gary Benson, Giancarlo Castaman, Pratima Chowdary, Hermann Eichler, Victor Jimenez-Yuste, Kaan Kavakli, Tadashi Matsushita, Lone Hvitfeldt Poulsen, Johannes Oldenburg, Amy Shapiro, Allison P. Wheeler, Silva Zupancic-Salek, Guy Young
Organizer
International Soceity on Thrombosis and Haemostasis(ISTH) 2019
Int'l Joint Research
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[Presentation] Myh9 R702C is associated with altered erythropoiesis in mice2019
Author(s)
Takeshi Kanematsu, Nobuaki Suzuki, Atsuo Suzuki, Shogo Tamura, Shuichi Okamoto, Yuichi Ishikawa, Akira Kasumi, Hitoshi Kiyoi, Hidehiko Saito, Shinji Kunishima, Tetsuhito Kojima, Tadashi Matsushita
Organizer
第81回日本血液学会学術集会
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