Basic construction of WT1-targetting CAR-T therapy for acute myeloid leukemia

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K09923
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 片山 直之 三重大学, 医学系研究科, 教授 (20185812)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 急性骨髄性白血病 / 白血病幹細胞 / CD25

Outline of Annual Research Achievements

CD25陽性急性骨髄性白血病（AML）の白血病幹細胞（LSC）におけるCD25の発現についての検討を継続して施行してきている。これまでに、CD25陽性AML症例のAML細胞から、LSCが含まれるCD34陽性CD38陰性あるいはCD34陽性分画からCD25陽性AML細胞とCD25陰性AML細胞を分離し、免疫不全マウス（NSG）へ移植し、生着細胞がヒトAML細胞であることを確認した。さらに、生着した細胞をCD25陽性AML細胞とCD25陰性AML細胞に分離し、二次移植を行ったが、CD25陽性AML細胞とCD25陰性AML細胞の双方が生着した。これらのNSG移植実験系からは、CD25の発現はLSC分画において変動することが明らかなっている。同様のことがin vitroの細胞培養系で再現できるかを検討した。CD34陽性CD25陽性AML細胞とCD34陽性CD25陰性AML細胞を分離し、IL-3、G-CSF、GM-CSF、EPO、TPO、SCFのサイトカインの存在下で48時間培養すると、CD34陽性CD25陽性AML細胞の培養では、CD34陽性CD25陽性AML細胞とCD34陽性CD25陰性AML細胞が検出される症例とCD34陽性CD25陽性AML細胞だけが検出される症例があった。CD34陽性CD25陰性AML細胞の培養では、CD34陽性CD25陽性AML細胞とCD34陽性CD25陰性AML細胞が検出された。LSC分画におけるCD25の発現は変動がin vitroでも確認された。CD25はCD25陽性AMLのLSCに特異的に発現されているのではなく、CD25陽性AMLの治療分子標的とはない難いことが示された。また、CD25陰性AMLのCD34陽性AML細胞をNSGに移植しても、CD34陽性分画において、CD25が陽性化することはなかった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

WT1を標的としたAMLのキメラ抗原受容体発現T細胞療法の基盤構築については、研究が進行していない。しかしながら、AMLおよびCMLの分子標的となりうる可能性の報告があったCD25分子について、AMLの分子標的とはならないことを示すことができたことは、AMLに対するキメラ抗原受容体発現T細胞療法を構築していく上においても有用な情報を与えたと思われる。すなわち、分子標的として有望なものとして報告されている分子についても、詳細な検証が必要であることを示しており、今後のAMLに対する治療戦略を考案する上で、考慮されるべき事項である。

Strategy for Future Research Activity

作製されたHLAクラスI/WT1分子由来ペプチド複合体を認識するモノクローナル抗体による、蛍光標識を用いてのフローサイトメーターでは、複合体の検出は感度以下であった。作製されたモノクローナル抗体によるHLAクラスI/WT1分子由来ペプチド複合体の検出感度を上げる工夫が必要である。ヒトAML細胞のWT1遺伝子の発現をリアルタイムRT-PCRにて検討し、WT1遺伝子の発現の高い症例のAML細胞での作製されたモノクローナル抗体による認識を確認するとともに、WT1遺伝子の発現の低い症例のAML細胞との比較解析も行うべきである。WT1遺伝子を導入した細胞株での検討も試みる必要がある。

Research Products

• [Journal Article] Clinicopathological features of TAFRO syndrome complicated by acquired hemophilia A and development of cardiopulmonary arrest that were successfully treated with VA-ECMO and tocilizumab (2019)
  • Author(s): Suzuki K, Matsumoto T, Iwashita Y, Ishikura K, Fujioka M, Wada H, Katayama N, Imai H
  • Journal Title: International Journal of Hematology Volume: 109 Pages: 737-743
  • DOI: 10.1007/s12185-019-02604-2
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Comments to: an evaluation of hemostatic abnormalities in patients with hemophilia by APTT waveform, peak heights of APTT waveform are useful for diagnosing hemophilia or inhibitor (2019)
  • Author(s): Matsumoto T, Wada H, Ohishi K, Yamashita Y, Ikejiri M, Katayama N
  • Journal Title: Clin Appl Thromb Hemost Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • DOI: 10.1177/1076029618824419
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Esophageal squamous cell neoplasia is an independent negative prognostic factor for head and neck cancer patients (2018)
  • Author(s): Hamada Y, Mizuno T, Tanaka K, Katsurahara M, Horiki N, Yamada R, Inoue H, Takei Y, Katayama N
  • Journal Title: Int J Clin Oncol Volume: 23 Pages: 243-248
  • DOI: 10.1007/s10147-017-1201-3
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The evaluation of D-dimer levels for the comparison of fibrinogen and fibrin units using different D-dimer kits to diagnose VTE (2018)
  • Author(s): Hasegawa M, Wada H, Yamaguchi T, Wakabayashi H, Fujimoto N, Matsumoto T, Hasegawa K, Yamada N, Ito M, Yamashita Y, Katayama N, Nakatani K, Sudo A
  • Journal Title: Clin Appl Thromb Hemost Volume: 24 Pages: 655-662
  • DOI: 10.1177/1076029617706755
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Successful treatment of primary bone marrow Hodgkin lymphoma with brentuximab vedotin: a case report and review of the literature (2018)
  • Author(s): Nagaharu K, Masuya M, Kageyama Y, Yamaguchi T, Ito R, Kawakami K, Ito M, Katayama N
  • Journal Title: J Med Case Rep Volume: 12 Pages: 151
  • DOI: 10.1186/s13256-018-1693-0
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Renal papillary tip extract stimulates BNP production and excretion from cardiomyocytes (2018)
  • Author(s): Goto I, Okamoto R, Hashizume R, Suzuki N, Ito R, Yamanaka K, Saito H, Kiyonari H, Tawara I, Kageyama Y, Ogihara Y, Ali Y, Yamada N, Katayama N, Ito M
  • Journal Title: PLoS One Volume: 13 Pages: e0197078
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0197078
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Early disease progression in patients with localized natural killer/T-cell lymphoma treated with concurrent chemoradiotherapy (2018)
  • Author(s): Yamaguchi M, Suzuki R, Kim SJ, Ko YH, Oguchi M, Asano N, Miyazaki K, Terui Y, Kubota N, Maeda T, Kobayashi Y, Amaki J, Soejima T, Saito B, Shimoda E, Fukuhara N, Tsukamoto N, Shimada K, Choi I, Utsumi T, Ejima Y, Kim WS, Katayama N
  • Journal Title: Cancer Sci Volume: 109 Pages: 2056-2062
  • DOI: 10.1111/cas.13597
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] IL-2/IL-3 interplay mediates growth of CD25 positive acute myeloid leukemia cells (2018)
  • Author(s): Nakase K, Kita K, Katayama N
  • Journal Title: Med Hypotheses Volume: 115 Pages: 5-7
  • DOI: 10.1016/j.mehy.2018.03.007
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Modified clot waveform analysis to measure plasma coagulation potential in the presence of the anti-factor IXa/factor X bispecific antibody emicizumab: comment (2018)
  • Author(s): Matsumoto T, Wada H, Toyoda H, Hirayama M, Yamashita Y, Katayama N
  • Journal Title: J Thromb Haemost Volume: - Pages: -
  • DOI: 10.1111/jth.14190
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Differences and similarities between disseminated intravascular coagulation and thrombotic microangiopathy (2018)
  • Author(s): Wada H, Matsumoto T, Suzuki K, Imai H, Katayama N, Iba T, Matsumoto M
  • Journal Title: Thromb J Volume: 16 Pages: 14-14
  • DOI: 10.1186/s12959-018-0168-2
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] An evaluation of the activated partial thromboplastin time waveform (2018)
  • Author(s): Matsumoto T, Wada H, Fujimoto N, Toyoda J, Abe Y, Ohishi K, Yamashita Y, Ikejiri M, Hasegawa K, Suzuki K, Imai H, Nakatani K, Katayama N
  • Journal Title: Clin Appl Thromb Hemost Volume: 24 Pages: 764-770
  • DOI: 10.1177/1076029617724230
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The plasma levels of ADAMTS-13, von Willebrand factor, VWFpp, and fibrin-related markers in patients with systemic sclerosis having thrombosis (2018)
  • Author(s): Habe K, Wada H, Higashiyama A, Akeda T, Tsuda K, Mori R, Kakeda M, Matsumoto T, Ohishi K, Yamanaka K, Katayama N, Mizutani H
  • Journal Title: Clin Appl Thromb Hemost Volume: 24 Pages: 920-927
  • DOI: 10.1177/1076029617736382
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] An evaluation of hemostatic abnormalities in patients with hemophilia according to the activated partial thromboplastin time waveform (2018)
  • Author(s): Katayama H, Matsumoto T, Wada H, Fujimoto N, Toyoda J, Abe Y, Ohishi K, Yamashita Y, Ikejiri M, Habe K, Katayama N
  • Journal Title: Clin Appl Thromb Hemost Volume: 24 Pages: 1170-1176
  • DOI: 10.1177/1076029618757344
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Clinical manifestation of patients with atypical hemolytic uremic syndrome with the C3 p.I1157T variation in the Kinki region of Japan. (2018)
  • Author(s): Matsumoto T, Toyoda H, Amano K, Hirayama M, Ishikawa E, Fujimoto M, Ito M, Ohishi K, Katayama N, Yoshida Y, Matsumoto M, Kawamura N, Ikejiri M, Kawakami K, Miyata T, Wada H
  • Journal Title: Clin Appl Thromb Hemost Volume: 24 Pages: 1301-1307
  • DOI: 10.1177/1076029618771750
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Expression of CD25 fluctuates in the leukemia-initiating cell population of CD25-positive AML (2018)
  • Author(s): Kageyama Y, Miwa H, Arakawa R, Tawara I, Ohishi K, Masuya M, Nakase K, Katayama N
  • Journal Title: PLoS One Volume: 13 Pages: e0209295
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0209295
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Expression of CD25 fluctuates in leukemia stem cell population of CD25-positive AML (2018)
  • Author(s): Kageyama Y, Miwa H, Arakawa R, Ohishi K, Masuya M, Nakase K, Ishikawa F, Katayama N
  • Organizer: 第23回ヨーロッパ血液学会
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 日本血液学会における医学系研究の利益相反（COL）管理 (2018)
  • Author(s): 片山直之
  • Organizer: 第80回日本血液学会学術集会
  • Invited
• [Presentation] DA-EPOCH-R with high-dose methotrexate (HD-MTX) for CD5+ DLBCL: Primary analysis of PEARL 5 study (2018)
  • Author(s): Miyazaki K, Asano N, Yamada T, Miyawaki K, Takasaki H, Igarashi T, Nishikori M, Ohta K, Sunami K, Yoshida I, Yamamoto G, Takahashi N, Okamoto M, Yano H, Nishimura Y, Tamaru S, Nishikawa M, Izutsu K, Kinoshita T, Suzumiya J, Ohshima K, Kato K, Katayama N, Yamaguchi M
  • Organizer: 第80回日本血液学会学術集会
• [Presentation] An analysis of the activated partial thromboplastin time waveform in patients with DIC (2018)
  • Author(s): Wada H, Matsumoto T, Ohishi K, Katayama N
  • Organizer: 第80回日本血液学会学術集会
• [Presentation] 溶血発作発症後早期にeculizumab投与を行い速やかな改善がみられた非典型的溶血性尿毒症症候群の一例 (2018)
  • Author(s): 松本剛史、塩谷拓也、伊野和子、宮崎香奈、藤枝敦史、杉本由香、俵功、山口素子、大石晃嗣、桝屋正浩、和田英夫、片山直之
  • Organizer: 第80回日本血液学会学術集会
• [Presentation] CCR2+ Monocyte-Derived Ly6C-F4/80+ Fibrocytes Inhibit Collagen Degradation and Contribute to the Development of Colon Fibrosis Via Production of TIMP-1 (2018)
  • Author(s): Masuya M,Kuroda N, Hachiya K, Tawara I, Kageyama Y, Ohishi K, Miwa H, Katayama N
  • Organizer: 第60回アメリカ血液学会
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Incidence and Risk Factors of Central Nervous System Relapse in Localized Extranodal NK/T-Cell Lymphoma, Nasal Type: An Analysis of Nkea Study (2018)
  • Author(s): Miyazaki K, Taguchi S, Oguchi M, Suzuki R, Asano N, Terui Y, Kubota N, Saito Y, Maeda T, Itasaka S, Kobayashi Y, Itami J, Amaki J, Akiba T, Muraya T, Ii N, Soejima T, Yamaguchi M, Katayama N
  • Organizer: 第60回アメリカ血液学会
  • Int'l Joint Research
• [Book] EBM血液疾患の治療 (2018)
  • Author(s): 藤枝敦史、片山直之
  • Total Pages: ５６７
  • Publisher: 中外医学社
  • ISBN: 978-4-498-22514-5