2017 Fiscal Year Research-status Report
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17K09962
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
松岡 由和 関西医科大学, 医学部, 助教 (70533420)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 造血幹細胞 / 間質細胞 / 自己複製 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
当該年度においては、ヒト造血幹細胞(HSC)からの遺伝子ノックアウト(KO)の技術基盤確立のため、ヒト臍帯血よりHSCが高度に濃縮される、18種類の分化抗原陰性(18Lin-)CD34+CD133+細胞を用いて、CRISPR/Cas9 systemによりCD34遺伝子のKOを試みた。その結果、Flow Cytometer 上で10%程度の細胞でCD34抗原の発現が抑えられていることが確認された。現在、HSCからの遺伝子KO効率を上げるため、既報の方法論を参考に改良を行っている。
加えて、研究代表者により樹立された、ヒトHSC分画に反応性を示す抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングに従事し、新たに50クローン分の活性を評価した。具体的には、研究代表者らにより見出された、ヒトHSC支持能を有するヒト骨髄CD45-Lin-CD271+SSEA-4+分画由来間質細胞(DP MSC)と18Lin-CD34+CD133+細胞の共培養系に、上記、ハイブリドーマ由来モノクローナル抗体(mAb)を添加することで、DP MSCによるHSC支持能に対する阻害活性を評価した。残念ながら、今回評価を行った抗体群には、HSC支持能に対する阻害活性を有するクローンを見出すことはできなかった。しかしながら、この過程の中でヒト臍帯血由来HSC分画に特異的に反応性を示す抗体の存在が明らかになっており、この抗原がヒトHSCの陽性分子マーカーとなりえる可能性が示唆された。
一方、研究代表者は、すでに、DP MSCからの支持能を共に50%程度抑制する、2種類のmAbs、mAb4.4.1およびmAb8.1.2を見出している。今後これらの抗体クローンを用いて、機能評価を進めていく。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究の遂行上、技術的な問題点はないが、他業務との兼ね合いにより、当初の予定より進行が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究代表者により樹立済みのmAb産生ハイブリドーマのうち、活性が未評価なものがおよそ100クローン残っている。そのため、これらのクローン由来mAbの活性評価を順次進める。加えて、mAb4.4.1およびmAb8.1.2が認識している抗原を質量分析により同定し、その機能解析を進める。
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| Causes of Carryover |
年度末に、論文投稿を行ったため、その掲載費用71万5千円を相当を留保した。結果、当該年度中に請求は来なかったが、すでに本年度初頭に前述の掲載費用の請求が来る予定であり、問題なく執行される。
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Research Products
(7 results)
