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2020 Fiscal Year Research-status Report

肺動脈性肺高血圧症における2型自然リンパ球の役割

Research Project

Project/Area Number 17K09965
Research InstitutionTohoku Medical and Pharmaceutical University

Principal Investigator

城田 祐子  東北医科薬科大学, 医学部, 准教授 (20455819)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 石井 智徳  東北大学, 大学病院, 特任教授 (10282138)
藤井 博司  東北大学, 医学系研究科, 准教授 (30531321)
藤原 亨  東北大学, 大学病院, 講師 (60333796)
Project Period (FY) 2017-04-01 – 2022-03-31
Keywords肺動脈性肺高血圧症 / 2型自然リンパ球 / 転写因子GATA2 / 転写因子GATA3
Outline of Annual Research Achievements

私たちは, GATA2コンディショニングノックアウトマウスを樹立した. GATA2floxマウスはGATA2のDNA結合に重要なエクソン5の両端にfloxを入れており、そのマウスにER-Creマウスと掛け合わせる. マウスのER-Creは細胞特異的なプロモーターで制御されてなく、エストロゲン(タモキシフェン)投与によりGATA2のエクソン5が欠損することで全身のGATA2の機能欠損を来たす. 以下の4つの条件で比較検討することとした。flox/flox, flox/flox-ER-Cre,マウスにおいてそれぞれ、タモキシフェンの導入または、非導入(PBS導入)で比較検討した. 生後10-12週のマウスを, 低酸素室(10%酸素)で飼育し, タモキシフェンを腹腔内投与しday 20-22にPAHの誘導の有無を解析した肺病変は、肺動脈弾性板が解離を観てリモデリングを評価し, 炎症細胞浸潤の程度をスコアリングする.心臓は, 右心負荷の有無を評価した. GATA2-KOマウスでは,コントロールと比較して, 肺動脈のリモデリングが強い傾向にあり,さらにその肺動脈周囲には強い炎症細胞浸潤を認めた.
ヒトのPAH症例のGATA2や自然リンパ球に関する遺伝子解析も進めている.DNAおよび血清・血漿・末梢血単核細胞を保存している.一部の検体でLin-CD127+ ILC2 をさらにIL-33R ないしCRTH2 陽性のサブセットに分けて、フローサイトメトリーで評価した (Lin-= CD3,CD4, CD8, CD19, CD56, CD14 neg).

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

flox/flox, flox/flox-ER-Cre,マウスを飼育しているが, ある程度の数が育たないと, 実験を進められない.
肺組織における、炎症細胞浸潤を認めるが、その細胞のサブタイプの同定は難しい.
ヒトのII型自然リンパ球(ILC2)は,皮膚,肺,脂肪組織に多く存在するが,末梢血におけるII型自然リンパ球の割合は,非常に少ないため,これを抽出して機能解析するのは難しいかも知れない.

Strategy for Future Research Activity

GATA2-KOマウスの研究に関しては,肺高血圧症を誘導した検体で,肺組織の免疫染色を行い,GATA2, GATA3の分布の確認を試みて, GATA2-KOマウスにおける炎症細胞浸潤の同定を試みる.血管内皮細胞にGATA2の発現が多い可能性があり, GATA2 GFP ノックインマウスを用いて、その肺切片で、GFP抗体による免疫染色を起きない、GATA2発現の局在について検討する。ヒトのPAH症例のGATA2や自然リンパ球に関する実験は, 遺伝子解析も進めていく. 一塩基多型(SNP)について健常者とPAH症例のGATA2,ILC2に関連する遺伝子を解析し,連鎖解析などを行い,GATA2やILC2の発現の意義について検討する.

Causes of Carryover

理由:現在、実験の検体やデータを収集している段階であり、当初予定した解析費用を執行できなかったため。
使用計画:実験データの解析費用及び成果発表のための旅費として令和3年度請求額と合わせて使用する予定である

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Published: 2021-12-27  

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