2019 Fiscal Year Annual Research Report
Identification of allergens for shrimp-dependent exercise-induced anaphylaxis and their application for diagnosis and prophylaxis
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17K10003
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
松尾 裕彰 広島大学, 病院(医), 教授 (60346385)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
横大路 智治 広島大学, 医系科学研究科(薬), 准教授 (70389120)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 食物アレルギー / エビ / 抗原 / FDEIA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
エビによる食物依存性運動誘発アナフィラキシー（FDEIA）患者を診断するために行われる負荷試験の感度は低い。同様に、臨床で使用されているエビ特異IgE抗体検査についても、確定診断されたエビFDEIA患者が陰性を示すケースが散見される。本研究では、エビFDEIA 患者の原因抗原を明らかにし、精製エビ抗原を利用した精度の高いエビFDEIAの診断法の開発を試みた。
バナメイエビ、ブラックタイガー、クルマエビ、タイショウエビのむき身より可溶性タンパク質を抽出し、二次元電気泳動にて分離後、エビFDEIA患者血清とインキュベートし、IgE結合タンパク質を解析した。その結果、40 kDaおよび70 kDaタンパク質にIgEの結合が認められた。これらのタンパク質を質量分析機により解析し、40kDaおよび70 kDaタンパク質は、それぞれfructose 1,6-bisphosphonate aldolase (FBA)およびNesprin-1 homologであることを明らかにした。
次に、バナメイエビを用いてこれらIgE結合タンパク質の精製法の検討を行い、硫酸アンモニウム沈殿、Resource Qカラム、HiTrap Butyl FFカラム、YMC-Pack C4カラムクロマトグラフィーにより精製できることを明らかにした。精製アレルゲンに対する患者血清IgEの結合性をwestern blot法で確認した結果、FBA特異IgE抗体の陽性率は9.5％（2/21）、Nesprin-1 homolog特異IgE抗体の陽性率は19.0％（4/21）であった。今後、ELISA法やImmunoCAP法を利用した特異IgE抗体価を定量的に解析する方法を確立することでエビFDEIA患者に対する検査精度の向上が期待できる。
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