自己免疫疾患の特異的免疫記憶の分子機構の解明と治療戦略の開発

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K10005
• Research Institution: Dokkyo Medical University
• Principal Investigator: 有馬 雅史 獨協医科大学, 医学部, 准教授 (00202763)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 福島 康次 獨協医科大学, 医学部, 教授 (00254996) ; 幡野 雅彦 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (20208523) ; 谷口 俊文 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (20724826) ; 倉沢 和宏 獨協医科大学, 医学部, 教授 (30282479) ; 杉山 公美弥 獨協医科大学, 医学部, 教授 (30364582) ; 大和田 高義 獨協医科大学, 医学部, 講師 (30456016) ; 平田 博国 獨協医科大学, 医学部, 講師 (60326890)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: ADAR1

Outline of Annual Research Achievements

本研究は２本鎖ＲＮＡ編集酵素であるＡｄｅｎｏｓｉｎｅ　Ｄｅａｍｉｎａｓｅｓ　Ａｃｔｉｎｇ　ｏｎ　ＲＮＡ－１（ＡＤＡＲ１）遺伝子改変マウスを用いた自己免疫疾患動物モデルを解析して疾患特異的な免疫機構の解明に繋がる探索的研究を行うことにより、ＡＤＡＲ１に着目した治療応用の基盤を確立することを目的とする。平成２９年度は生理的なＡＤＡＲ１　の各免疫系細胞における機能を中心に解析を行った。主にＯＸ４０プロモーターによって発現するＣｒｅマウスを使用することによって、活性化Ｔ細胞特異的ＡＤＡＲ１－ＫＯマウスを解析した。１）胸腺内ＣＤ４／ＣＤ８　Ｔ細胞の分画比率はＡＤＡＲの存在の有無に影響されなかった。２）無刺激の脾臓内ＣＤ４＋Ｔ細胞のナイーブおよびメモリー分画比率はＡＤＡＲ１の存在の有無に影響されなかった。３）ＤＮＰ－ＯＶＡ腹腔内投与による免疫後９日のＴＦＨ細胞（ＣＸＣ５＋ＰＤ１＋）分画はＡＤＡＲ１ｃＫＯで有意に増加した。一方、ＴＦＨ細胞の中でＧＣ－ＴＦＨ細胞（ＧＬ７＋）はＡＤＡＲ１ｃＫＯで有意に減少し、ＩＬ－２１やＩＬ－４の産生が低下していた。４）脾臓内の胚中心形成がＡＤＡＲ１－ｃＫＯで抑制された。５）ＤＮＰ特異的ＩｇＧの血清抗体価はＡＤＡＲ１ｃＫＯで有意に減少した。以上よりＡＤＡＲ１はＴＦＨからＧＣ－ＴＦＨの分化の促進に関与することによって胚中心の形成を介して獲得免疫系の成立に極めて重要な役割を果たしていると考えられた。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

ＡＤＡＲ１ストレートノックアウトマウスは胎生致死を示すことから、コンディショナルノックアウトマウスの使用により細胞特異的にＡＤＡＲ１を欠損させて実験を行うことを基本方針としている。そこでＯＸ４０プロモーター支配下ＣｒｅマウスによりＴリンパ球特異的ＡＤＡＲ１ｃＫＯマウスを使用する予定であったが、ＡＤＡＲ１ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ－ｃＫＯマウスの約６０％が生後３Ｗで自然死するため、実験に使用するマウスの確保が困難であった。

Strategy for Future Research Activity

ＡＤＡＲ１ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ－ｃＫＯマウスに加え、ＡＤＡＲ１＋／ｆｌｏｘ－ｃＫＯマウスを解析することによってｇｅｎｅ　ｄｏｓａｇｅ効果について解析して、ＡＤＡＲ１の生体における各免疫担当細胞に対して安定的に解析できるようにする。さらにＩｍｉｑｕｉｍｏｄ　を経皮的に週３　回、４　週間反復投与することによりＳＬＥモデルを作製して抗ＤＮＡ　抗体の検出およびループス様腎炎の病理的解析を行う予定である。

Causes of Carryover

実験に使用する抗体の納入が当該年度内に間に合わなかった。