先天性CMV感染症におけるSLITRK6（遺伝性難聴原因遺伝子）の役割について

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K10068
• Research Institution: National Center for Child Health and Development
• Principal Investigator: 藤原 成悦 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 免疫アレルギー・感染研究部, 特任研究員 (30173488)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中村 浩幸 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 免疫アレルギー・感染研究部, 室長 (70256866)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 先天性サイトメガロウイルス感染症 / サイトメガロウイルス / CMV / SLITRK6 / 難聴

Outline of Annual Research Achievements

先天性サイトメガロウイルス（CMV）感染は、神経・感覚器障害（精神発達遅滞や感音性難聴など）をはじめさまざまな臓器障害を引き起こすことが知られており、感染児のQOLに多大な影響をおよぼす。しかし、先天性CMV感染がどのようなメカニズムで神経・感覚器障害を引き起こすかについては不明な点が多い。我々はこれまでにヒト神経系培養細胞を用いたin vitro CMV感染モデルを構築・解析した結果、遺伝性難聴の原因遺伝子の一つであるSLITRK6の発現をCMVが抑制することを見出した。また、神経系細胞におけるSLITRK6発現変動の意義を明らかにするために、ヒト神経系培養細胞に対してSLITRK6発現ベクターあるいはSLITRK6 shRNA発現ベクターを導入し、SLITRK6発現を人為的に変動させた細胞を作出した。本年度は、これらの細胞について、神経系細胞の形態や生存率の違い、またこれらの細胞にCMVを実験的に感染させた場合の細胞障害性の程度など、CMVによる細胞障害性とSLITRK6発現レベルとの間に関連があるか検討を進めた。また、マウスサイトメガロウイルス (MCMV)をマウス脳に感染させると神経系障害や難聴を発症することが知られていることから、MCMVによる神経・感覚器障害とSLITRK6発現変動の関連を解析する目的で、マウス培養細胞を用いたMCMV感染系構築に向けた実験に着手した。これらの解析を進めることで、CMVによるSLITRK6発現抑制が神経系細胞の機能やCMV生活環に与える影響について明らかにする予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

神経系細胞の機能やCMV生活環に対するSLITRK6発現変動の影響について解析を進めた。また、MCMVを用いたin vitro実験を行うための感染実験系構築に着手した。

Strategy for Future Research Activity

神経系細胞の機能およびCMV生活環に対して、SLITRK6の発現変動がどのような影響を及ぼすかについて引き続き解析を進める予定である。また、MCMVがマウスに引き起こす神経・感覚器障害のメカニズムにSLITRK6発現変動が関与するのかについても、実験系を確立し解析に着手する予定である。

Causes of Carryover

本年度は、ヒト神経系培養細胞について形態や生存率の違いや、CMVを実験的に感染させた場合の細胞障害性の程度など、CMVによる細胞障害性とSLITRK6発現レベルとの間に関連があるか検討を進めた。これらの実験は当初の予定より少量の試薬で完了することができたため、使用した研究費が計画を下回った。一方来年度は、実験結果の整理のために人件費を必要とするため、本年度に未使用となった研究費を充てる計画である。

Research Products

• [Journal Article] Animal models of human gammaherpesvirus infections (2018)
  • Author(s): Fujiwara S.
  • Journal Title: Adv Exp Med Biol Volume: 1045 Pages: 413-436
  • DOI: 10.1007/978-981-10-7230-7_19
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] STAT3 is constitutively activated in chronic active Epstein-Barr virus infection and can be a therapeutic target. (2018)
  • Author(s): Onozawa E, Shibayama H, Takada H, Imadome K, Aoki S, Yoshimori M, Shimizu N, Fujiwara S, Koyama T, Miura O, Arai A
  • Journal Title: Oncotarget Volume: 9 Pages: 31077-31089
  • DOI: 10.18632/oncotarget.25780
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] A nationwide survey on chronic active Epstein-Barr virus infection in japan based on new diagnostic criteria: clinical features and treatment strategies (2018)
  • Author(s): Arai A, Yonese I, Sakashita C, Imadome K, Kobayashi T, Sawada A, Ito Y, Ohga S, Kimura H, and Fujiwara S.
  • Organizer: American Society of Hematology Annual Meeting
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] The presence of defective Epstein-Barr virus (EBV) infection in patients with EBV-associated hematological malignancy (2018)
  • Author(s): Okuno Y, Murata T, Sato Y, Fujiwara, S, Kimura H and 32 other authors
  • Organizer: American Society of Hematology Annual Meeting
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] ヒトサイトメガロウイルスはIE2を介して難聴原因遺伝子SLITRK6の発現を抑制する (2018)
  • Author(s): 廖華南、渡邉拓実、藤原成悦、中村浩幸
  • Organizer: 第32回ヘルペスウイルス研究会
• [Presentation] Innate immune response to Rubella virus infection in human neural cells (2018)
  • Author(s): Liao H, Watanabe T, Fujiwara S, Nakamura H
  • Organizer: 第66回日本ウイルス学会学術集会
• [Presentation] 慢性活動性Epstein-Barrウイルス感染症における網羅的遺伝子解析 (2018)
  • Author(s): 奥野友介, 村田貴之, 佐藤好隆, 藤原成悦、木村宏、その他32名
  • Organizer: 第80回日本血液学会学術集会プレナリ－セッション