アトピー性皮膚炎におけるマスト細胞活性化制御分子の生体内スクリーニング法の開発

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K10253
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 安藤 智暁 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10724669)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: マスト細胞 / ゲノム編集 / アレルギー

Outline of Annual Research Achievements

本研究はアトピー性皮膚炎モデルにおいてマスト細胞の活性化・抑制に関わる分子をin vivoでスクリーニングする方法の開発を行う。平成29年度にIL1RL1分子の欠損マウスが利用可能となり、野生型とIL1RL1欠損マウスにおいてアトピー性皮膚炎モデルを誘導したところ、本モデルにおいてもIL1RL1分子が何らかの役割を果たしていることが判明した。IL1RL1はマスト細胞のアレルギー炎症における活性化や分化に重要であることが示されているほか、ヒトのアトピー性皮膚炎との関連性がゲノムワイド関連解析（GWAS）で指摘されている分子である。平成30年度はまず実際にIL1RL1分子がマスト細胞のin vivoでの活性化と関連するかの検討を行ったところ、IL1RL1分子の可溶型に既報とは異なる作用があることが示唆され、さらなる検討が必要であることが判明した。
また、活性化状態の記録方法についての検討を行い、細胞内染色によるマスト細胞の活性化指標となる分子の発現を確認したところ、in vitroでの検討ではMCP-1が鋭敏な指標となる可能性が示唆された。
また、本研究のスクリーニングにおいてはゲノム編集の手法を用いる予定であるが、この手法においてはCas9蛋白質をマスト細胞に発現させることが必要になる。平成29年度、レトロウイルスベクターも作製することに成功したが、平成30年度にその有用性を検討したところ、残念ながら少数のスクリーニングには対応できるが、ゲノムワイドな規模のスクリーニングに対応できる効率に至らず、さらに検討を重ねる必要がある。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

本年度はマスト細胞の活性化状態の記録方法についての検討を行ったが、新たに候補となる指標分子が判明し、新たなコンストラクトの作製が必要になった。また、平成29年度にモデルの妥当性を後押しすることになったIL1RL1分子の欠損マウスにおける実際のマスト細胞の活性化について検討することが必要になった。結果的に、IL1RL1分子の既報とは異なる作用の存在が示唆され、並行してこの作用についても明らかにする必要が出てきた。

Strategy for Future Research Activity

平成31年度は、マスト細胞の活性化状態の記録方法について、バリエーションを可能な限り検討する。その際、平成30年度に新たに明らかになった活性化指標分子も利用して、これまでの遅れを取り戻し、本年度中にin vivoでの実験に進み、当初の目標を達成したい。

Causes of Carryover

一部の実験につき予定よりも安価に実施できたため残額が生じた。新たな候補分子も含めた新規ベクター作製が次年度に必要となるため、これに使用する予定である。