2017 Fiscal Year Research-status Report
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17K10562
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| Research Institution | Jichi Medical University |
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Principal Investigator |
野田 弘志 自治医科大学, 医学部, 准教授 (00382937)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 浩一 自治医科大学, 医学部, 准教授 (70332369)
力山 敏樹 自治医科大学, 医学部, 教授 (80343060)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 多発癌 / セントロメア / 脱メチル化異常 / 染色体不安定性 / Satelliteαtranscript |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【研究目的】
癌患者は、術後の残存臓器に新たな腫瘍性病変を高率に生じます。その機序は明らかではありませんが、発癌の母地「Field Cancerization; FC」の関与が考えられます。FCにはさまざまな遺伝子の異常が報告されていますが、我々はメチル化修飾に注目してきました。正常な染色体分配にはセントロメア領域のメチル化が必須で、そこから転写されるnon-cording RNAであるSatelliteαtranscript(SatA)により染色体の均等分配が司られます。我々はセントロメア領域のメチル化異常によりSatAが過剰発現し、特定の染色体に数的異常が生じる事を明らかにしました。この変化は癌部のみならず癌の背景粘膜でも認められ、特に多発癌の背景粘膜で高値を示すことから、SatAは多発癌のFCに関わると考えています。本研究ではSatAが関わる多発癌発生の機序を明らかにします。
【研究計画】
①in vitroでの正常組織に対するSatAの過剰発現の影響を検証するために、レンチウイルスを用いてSatAを乳腺上皮細胞株に遺伝子導入します。CGHで染色体不安定性をDNAコピー数の変化を評価し、発現アレイを用いて遺伝子発現の網羅的解析を行い、責任遺伝子の同定を試みます。セントロメア関連蛋白の発現変化とキネトコア形成への影響を免疫組織染色法及びFISHで観察します。さらに脱メチル化剤（5-Aza-dC）を加えて脱メチル化異常の影響を評価します。また、
② in vivoでの検証をマウスの乳癌発生モデルを用いて行います、モデルマウスの乳房にレンチウイル用いて遺伝子導入を行い、発生時期や数、多発及び多臓器発生の頻度、染色体コピー数の変化や遺伝子発現に及ぼす影響を評価します。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
①乳腺上皮細胞株にSatAを遺伝子導入し、染色体不安定性をもたらす有糸分裂異常を免疫細胞化学によって調べました。Abnormal segregation、MicronucleiおよびAnaphase bridgeといった有糸分裂異常の頻度はSatAの過剰発現細胞において有意に増加していることを明らかにしました。
②マウスの乳癌発生モデルにSatAを遺伝子導入するため、マウスのSatAであるmajor satelliteを有するレンチウイルスの作成を行いました。
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| Strategy for Future Research Activity |
①CGHで染色体不安定性をDNAコピー数の変化を評価し、発現アレイを用いて遺伝子発現の網羅的解析を行い、責任遺伝子の同定を試みます。セントロメア関連蛋白の発現変化とキネトコア形成への影響を免疫組織染色法及びFISHで観察します。さらに脱メチル化剤（5-Aza-dC）を加えて脱メチル化異常の影響を評価します。
②マウスの乳癌発生モデルに着手します。
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| Causes of Carryover |
消耗品価格の変動のため生じた平成29年度の残額と、平成３0年度分に請求した助成金とあわせて消耗品の購入と旅費に計上します。
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[Journal Article] Monitoring circulating tumor DNA revealed dynamic changes in KRAS status in patients with metastatic colorectal2018
Author(s)
Yuji Takayama, Koichi Suzuki, Yuta Muto, Kosuke Ichida, Taro Fukui, Nao Kakizawa, Hideki Ishikawa, Fumiaki Watanabe, Fumi Hasegawa, Masaaki Saito, Shingo Tsujinaka, Kazushige Futsuhara, Yasuyuki Miyakura, Hiroshi Noda, Fumio Konishi, Toshiki Rikiyama
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Journal Title
Oncotarget
Volume: 9
Pages: 24398～24413
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Appearance of KRAS mutated circulating tumor DNA during various treatments for metastatic colorectal cancer patients2017
Author(s)
Takayama Y, Suzuki K, Ichida K, Fukui T, Kakizawa N, Watanabe F, Hasegawa F, Tsujinaka S, Miyakura Y, Noda H, Rikiyama T
Organizer
Exosomes and Liquid Biopsies ASIA
Int'l Joint Research
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