核Notchを標的とするガンマセクレターゼ阻害による大腸癌治療

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K10621
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 野澤 宏彰 東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (80529173)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 川合 一茂 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (80571942) ; 畑 啓介 東京大学, 医学部附属病院, 特任講師 (60526755) ; 渡邉 聡明 東京大学, 医学部附属病院, 教授 (80210920) [Withdrawn]
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 大腸癌 / ガンマセクレターゼ / Notch

Outline of Annual Research Achievements

Notchの大腸癌細胞の発現、とくに核内における発現と、予後不良であるという、臨床研究の報告から、Notchを治療標的としうるのではないかという着想のもとに、ガンマセクレターゼ阻害の大腸癌における影響をin vitroで検証することから着手している。
ガンマセクレターゼ阻害薬として既に臨床応用され、副作用も含めて情報の豊富な塩酸ドネペジルを選択し、さらにポジティブコントロール用のNotchリガンドとしてJagged-1を選んだ。Notch1～４、ヒト大腸癌株のLovo株、Caco2株、SW480株、HT29株の４株について、抗Notch1～4抗体による細胞染色法を用いたスクリーニングを施行し、Notch活性およびガンマセクレターゼ阻害薬反応性の特に高い受容体としてNotch3を選出し、細胞株としてはLovo株とCaco2株を選出した。ウエスタンブロッティング法を行ったところ、Lovo株でガンマセクレターゼ阻害薬による活性型Notch3タンパクの発現量低下を確認した。
次いでリアルタイムPCR法によるNotch経路の下流因子の評価を行った結果、Lovo及びCaco2株において、Jagged-１を投与して亢進したHEY１遺伝子のmRNA転写活性が、ガンマセクレターゼ阻害薬により大きく抑制されることを確認した。他のNotch経路遺伝子であるHEY2やHES1、HES2遺伝子でも同様の傾向が示され、詳細な評価を進めている。
以上、ヒト大腸癌においてNocth3が発現し、それをガンマセクレターゼ阻害薬が抑制することを、in vitroの実験系にて定性的かつ定量的に示することができた。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

細胞実験はほぼ終了したが、動物実験が現在準備中である。

Strategy for Future Research Activity

これまでにヒト大腸癌においてNocth3が発現し、それをガンマセクレターゼ阻害薬が抑制することを定性的定量的に示することができたが、現在MTSアッセイによるin vitroでの腫瘍増殖抑制効果の定量的評価を進めつつ、マウスにおいてヒト大腸癌(Lovo株、Caco2株)の転移モデルを作成し、ガンマセクレターゼ阻害薬をマウスの腹腔内に定期的に投与することで生体中での腫瘍増殖抑制効果を確認すべく実験準備中である。

Research Products

• [Journal Article] Adjuvant chemotherapy improves prognosis of resectable stage IV colorectal cancer: A comparative study using inverse probability of treatment weighting. (2019)
  • Author(s): Nozawa H, Takiyama H, Hasegawa K, Kawai K, Hata K, Tanaka T, Nishikawa T, Sasaki K, Kaneko M, Murono K, Emoto S, Sonoda H, Nakajima J.
  • Journal Title: Ther Adv Med Oncol Volume: in press Pages: in press
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Obstruction is associated with perineural invasion in T3/T4 colon cancer (2019)
  • Author(s): Nozawa H, Morikawa T, Kawai K, Hata K, Tanaka T, Nishikawa T, Sasaki K, Shuno Y, Kaneko M, Hiyoshi M, Murono K, Emoto S, Sonoda H, Fukayama M, Ishihara S.
  • Journal Title: Colorectal Dis Volume: in press Pages: in press
  • Peer Reviewed