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2017 Fiscal Year Research-status Report

To identify the molecular mechanism underlying colorectal cancer progression via RNF43

Research Project

Project/Area Number 17K10639
Research InstitutionKumamoto University

Principal Investigator

杉原 栄孝  熊本大学, 医学部附属病院, 医員 (10608863)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 石本 崇胤  熊本大学, 医学部附属病院, 特任准教授 (00594889)
今井 克憲  熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 助教 (60555746)
今村 裕  公益財団法人がん研究会, 有明病院 消化器外科, 副医長 (70583045)
Project Period (FY) 2017-04-01 – 2020-03-31
Keywords大腸癌 / Wntシグナル / RNF43
Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は標的遺伝子発現の増幅や細胞増殖、細胞、細胞運動などを調節し、様々な癌腫において活性化しているWntシグナルを抑制する癌抑制遺伝子であるRNF43のmutationや発現低下が消化管上皮および大腸腫瘍進展における及ぼす影響を明らかにする事であった。
RNF43野生株および変異株それぞれの大腸癌細胞株を用いてRNF43siRNAを行い腫瘍増殖能の評価を行った。またTimlapse Imagingを用いて遊走能の評価を行った。次にCRISPER-Cas9システムを用いてRNF43 knockoutマウスを作成し、AOM-DSS大腸癌モデルで大腸癌発がんマウスを誘導させて発癌、腫瘍増殖に及ぼす影響を検討した。あわせてRNF43 WT/knockoutそれぞれの大腸癌マウスにおけるWntシグナル下流遺伝子の発現をreal-time qPCRにより評価した。さらにRNF43 WT/knockoutマウスにおけるオルガノイド形成したCryptwo比較し、RNF43欠失に伴う腸管幹細胞分画の拡大に与える影響についての評価も行った。大腸癌臨床検体を用いたRNF43変異に伴う臨床病理学的検討においては、パイロシークエンス法を用いてRNF43 mutation hot spotの解析を行ない、臨床病理学的因子および予後との相関解析を行なった。以上の研究からRNF43が大腸癌増殖に関与し、無再発生存期間やmicrosatellite instabilityなどと相関することが明らかとなった。今後はこれまでの知見をもとに、RNF43関連分子阻害剤による腫瘍増殖抑制効果について検討を行っていく予定である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

熊本大学の臨床および基礎研究室、それぞれの研究組織が得意とする研究手法を活かした共同研究を展開する事が出来ている。既にin vitroでの解析、臨床検体を用いた予後解析、CRISPR/Cas9システムを用いた遺伝子改変マウスの作製が終了している。本研究の成果は日本国内の複数の全国学会、アメリカ癌学会総会にて報告をおこなった。現在、これまでの本研究成果をまとめて腫瘍学トップジャーナルへの投稿準備を進めている。

Strategy for Future Research Activity

本研究において作成したRNF43ノックアウトマウスを用いた解析から、RNF43が腫瘍増殖にかかわり、また腸管幹細胞においてもRNF43欠失は腫瘍増大に関与することが明らかとなった。現時点ではまだ腫瘍の表現型以外に腫瘍増大につながる分子論を説明できるデータを得ていないが、Wntシグナル下流遺伝子の発現上昇を確認している。今後RNF43遺伝子と大腸癌におけるAPC遺伝子などの様々な遺伝子変異との関連についても検討を行っていく。またRNF43関連分子阻害剤による腫瘍増殖抑制効果について検討を行っていく予定である。

Causes of Carryover

試薬、消耗品については、医局保管のを使用することが出来た。
試薬、消耗品の購入費、及び、研究データの管理、資料整理を行ってもらうための事務補佐員の雇用経費に充てたいと考える。

  • Research Products

    (6 results)

All 2017

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (3 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results)

  • [Journal Article] Activation of Transforming Growth Factor Beta 1 Signaling in Gastric Cancer-associated Fibroblasts Increases Their Motility, via Expression of Rhomboid 5 Homolog 2, and Ability to Induce Invasiveness of Gastric Cancer Cells.2017

    • Author(s)
      Ishimoto T, Miyake K, Nandi T, Yashiro M, Onishi N, Huang KK, Joyce LN, Kalpana R, Tay ST, Suzuki Y, Cho BC, Kuroda D, Arima K, Izumi D, Iwatsuki M, Baba Y, Oki E, Watanabe M, Saya H, Hirakawa K, Baba H, Tan P
    • Journal Title

      Gastroenterology

      Volume: 153(1) Pages: 191-204

    • DOI

      10.1053/j.gastro.2017.03.046.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Potential of a cure in patients with colorectal liver metastases and concomitant extrahepatic disease.2017

    • Author(s)
      Imai K, Castro Benitez C, Allard MA, Vibert E, Sa Cunha A, Cherqui D, Castaing D, Bismuth H, Baba H, Adam R
    • Journal Title

      J Surg Oncol.

      Volume: 115(4) Pages: 488-496

    • DOI

      10.1002/jso.24539.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Long-term outcomes of radiofrequency ablation combined with hepatectomy compared with hepatectomy alone for colorectal liver metastases.2017

    • Author(s)
      Imai K, Allard MA, Castro Benitez C, Vibert E, Sa Cunha A, Cherqui D, Castaing D, Baba H, Adam R.
    • Journal Title

      Br J Surg.

      Volume: 104(5) Pages: 570-579

    • DOI

      10.1002/bjs.10447.

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Functional role of Ring Finger Protein 43 in intestinal stem cells during colorectal tumorigenesis2017

    • Author(s)
      Eto T, Ishimoto T, Oda E, Kuroda D, Arima K, Ohuchi M, Nakamura K, Sawayama H, Kinoshita K, Iwatsuki M, Baba Y, Sakamoto Y, Yoshida N, Baba H.
    • Organizer
      AACR Annual Meeting 2017
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 大腸癌進展における Ring Finger Protein 43(RNF43)の機能解析2017

    • Author(s)
      江藤二男、石本崇胤、内原智之、織田絵里、問端輔、八木泰佑、黒田大介、有馬浩大、大内繭子、中村健一、澤山浩、木下浩一、岩槻政晃、馬場祥史、坂本快郎、吉田直矢、馬場秀夫
    • Organizer
      第117 回日本外科学会定期学術集会
  • [Presentation] 大腸癌におけるRing Finger Protein 43 発現と腫瘍発育進展の検討2017

    • Author(s)
      江藤二男、石本崇胤、内原智幸、八木泰佑、黒田大介、澤山浩、日吉幸晴、岩槻政晃、馬場祥史、宮本 裕士、吉田 直矢、馬場 秀夫
    • Organizer
      第 28 回消化器癌発生学会

URL: 

Published: 2018-12-17  

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