2017 Fiscal Year Research-status Report
椎間板変性におけるWntシグナルを介す転写制御機構の解析と新規腰痛治療薬の探索
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17K10945
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| Research Institution | Tokai University |
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Principal Investigator |
檜山 明彦 東海大学, 医学部, 講師 (00514382)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
酒井 大輔 東海大学, 医学部, 准教授 (10408007)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | Ｗｎｔシグナル / 神経栄養因子 / ＮＧＦ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまで椎間板におけるＷｎｔシグナルと神経栄養因子とのシグナルメカニズムは不明であった．そこでＷｎｔシグナルによるＮＧＦの影響を引き続き解析した。
実験はＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（ｎ＝３２，１１週齢）から採取した髄核細胞を用いた。採取した髄核組織を分離後に、単層培養を行い各々実験に用いた。
ＷｎｔシグナルによるＮＧＦの影響を解析するため、Ｗｎｔ活性化剤であるＢＩＯ（６－ｂｒｏｍｏｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３－ｏｘｉｍｅ）を２４時間添加しＮＧＦの転写活性を評価した。その結果、Ｗｎｔの活性化剤であるＢＩＯを添加後（０．１μＭ－１．０μＭ）のＮＧＦの転写活性には非添加群と比較し有意な変化はみられなかった。またＮＧＦのレポーターとＷｔ－β－ｃａｔｅｎｉｎとの遺伝子導入後のＮＧＦの転写活性の評価でも同様の結果であった。転写レベルではＷｎｔシグナルの活性化によってＮＧＦの発現変化はみられなかったため、引き続き遺伝子や蛋白レベルでの解析をおこなった。ＢＩＯを添加後のＮＧＦの遺伝子発現量やそのレセプターである低親和性受容体ｐ７５、高親和性受容体ＴｒｋＡの遺伝子発現量には非添加群と比較して有意差はなかった。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法を用いた蛋白発現量の解析でも、ＢＩＯ添加後（２４時間）のＮＧＦ蛋白発現量にには非添加群と比較して有意差はなかった。
以上の結果から、椎間板細胞ではＷｎｔシグナルの活性化は神経栄養因子ＮＧＦの発現に影響がないことが示唆された。この事からＷｎｔシグナルは直接的な神経成長因子ＮＧＦの発現には関与せず、疼痛伝達においてはＷｎｔシグナル以外の因子が間接的に関わっている可能性が示唆された．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
平成30年度は大型動物椎間板変性モデルを用いたWntシグナルと抗Wnt抗体(抗Sclerostin抗体)や抗NGF抗体における椎間板変性抑制効果を明らかにすることを目的としていたが、予算の関係から、in vivoでの解析にとどまっており、in vitroの解析からも当初の研究開始の予想と反する結果が得られているため
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| Strategy for Future Research Activity |
大型動物椎間板変性モデルを用いたWntシグナルと抗Wnt抗体(抗Sclerostin抗体)や抗NGF抗体における椎間板変性抑制効果を明らかにするためには外部からの獲得資金が必要である。
また抗Wnt抗体(抗Sclerostinヒト化抗体;romosozumab、現在国内未承認)や抗NGF抗体(fasinumab;REGN475、現在国内未承認)については腰痛治療や椎間板変性抑制効果が期待されるためin vitroでの解析を推進していく。
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