2018 Fiscal Year Research-status Report
Multimodal therapy by microRNA-encoding oncolytic virus
| Project/Area Number |
17K10970
|
|---|
| Research Institution | Hiroshima University |
|---|
Principal Investigator |
久保 忠彦 広島大学, 医歯薬保健学研究科(医), 准教授 (70397959)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
安達 伸生 広島大学, 医歯薬保健学研究科(医), 教授 (30294383)
古田 太輔 広島大学, 病院(医), 助教 (30781645)
坂口 剛正 広島大学, 医歯薬保健学研究科(医), 教授 (70196070)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
|
| Keywords | 腫瘍溶解ウイルス / 悪性腫瘍 / マイクロＲＮＡ |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
ヒトmicroRNA-34a , microRNA-29a , microRNA-143 cDNAをVSVゲノムDNA (pVSV-NX2、NC001560) に大腸菌を用いて挿入し，全長のDNAプラスミドを作成した。これをヘルパープラスミドであるpIRES-L，pIRES-N，pIRES-Pと共にT7 RNA polymeraseを発現するHamster腎由来BHK細胞に導入して，組換えウイルスを作成した。
各種力価のVSV-microRNA-34a , microRNA-29a , microRNA-143をヒト由来培養骨肉腫細胞、マウス由来培養骨肉腫細胞（LM8）に感染させてウイルス感染量をreal time RT-PCRにて定量評価した。また、感染された骨肉腫細胞からの各microRNA発現量をRT-PCRにて測定した。さらに、各種力価のVSV-microRNAを各種骨肉腫細胞に感染させて細胞増殖能（MTT assay）、アポトーシス誘導能（Annexin V/PI法）、細胞浸潤・遊走能（Cell Migration Invasion Assay）を測定し、対照群として正常ヒト骨髄細胞を用い比較し、３種類のVSV-microRNAとも有効な抗腫瘍効果を認めた。
６週齢C3Hマウスの背部に高肺転移性マウス骨肉腫細胞LM8（1 X 107 cells）を移植し、骨肉腫動物モデルを作成した。腫瘍径が10mmに達したことを確認後、VSV-microRNA-34a、VSV-microRNA-29a、VSV-microRNA-143単独治療群、VSV-microRNA-34a, -29a, -143併用治療群を作成した。経時的に肺転移巣（X線撮影）を観察し、隔週に屠殺し腫瘍増殖倍率の計測、組織学的評価を行っている。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
申請時の計画通り、細胞実験を行い、マウス実験を継続している。
|
| Strategy for Future Research Activity |
申請時の計画通り、今年度と来年度でマウス実験を終了予定である。
|
