2019 Fiscal Year Research-status Report
protein kinase Dによる血管収縮制御の解明と血管障害への応用
Project/Area Number |
17K11058
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Research Institution | Yokohama City University |
Principal Investigator |
水野 祐介 横浜市立大学, 附属病院, 准教授 (80433192)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
古賀 資和 横浜市立大学, 医学部, 助教 (00637233)
渡辺 至 横浜市立大学, 医学研究科, 客員教授 (20534142)
川上 裕理 横浜市立大学, 附属市民総合医療センター, 講師 (90407958)
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Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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Keywords | Protein kinase D / 血管収縮 / MYPT1 / actin |
Outline of Annual Research Achievements |
我々は、ラット大動脈のnorepinephrine刺激収縮がprotein kinase D (PKD) 阻害薬CRT006616により用量依存性に抑制され、またCRT006616の静脈内投与により 血管抵抗低下、血圧低下が出現することを見出した。ラット大動脈においてnorepinephrin刺激によるMYPT1およびミオシン軽鎖のリン酸化をCRT006616が阻害することも観察した。しかしRhokinase 阻害剤による同程度の血管収縮抑制時に比較して、CRT006616による収縮抑制中はMYPT1のリン酸化抑制は小さかった。 一方で、CRT006616はactin polymerization を部分的に抑制したことから、PKDは少なくともMYPT1のリン酸化及びactin polymerizationを介し、血管収縮に関与している可能性が示唆された。またCRT006616は細胞内カルシウム濃度に影響を与えなかった。 そこで、PKDのより選択的な抑制の影響を検討するため、血管平滑筋培養細胞を用いてPKDの3つのisoformをsiRNAを用いてノックダウンした。その結果、PKD1,PKD3をノックダウンしたヒト大動脈平滑筋細胞ではMYPT1のリン酸化が抑制されたが、PKD2をノックダウンした細胞では抑制されなかった。 これまでの結果から、PKD1、PKD3はMYPT1のリン酸化を介して、またactin polymerizationにも影響し、血管平滑筋の収縮に関与している可能性が示された。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
中心となる実験を行い概ねの方向性、結論を得たが、他のPKD阻害剤の使用や、siRNAを用いたMYPT1以外の実験を行う。 また、学会発表、論文発表に至っていない。
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Strategy for Future Research Activity |
これまでのデータを補強するために、他のPKD阻害剤の使用や、siRNA導入細胞を用いてMYPT1リン酸化以外のデータを得ていく。
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Causes of Carryover |
実験計画が比較的進んだ部分については、動物購入費、維持費、試薬代、人件費等が予定より少なく済んだ。今年度に行う予定の異なるPKD阻害薬を用いた動物実験、細胞実験に使用する予定である。
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