2019 Fiscal Year Annual Research Report
The elucidation of the genetic pathway of hypospadias and development of a new surgical method using a gene transferred cell sheet
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17K11186
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
黒川 覚史 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 研究員 (50468253)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
安井 孝周 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 教授 (40326153)
水野 健太郎 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 准教授 (70448710)
守時 良演 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 研究員 (50595395)
西尾 英紀 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 助教 (10621063)
神沢 英幸 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 研究員 (00551277)
林 祐太郎 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 教授 (40238134)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 尿道下裂 / モデル動物 / 遺伝子 / マイクロアレイ / パスウェイ解析 / 抗アンドロゲン剤 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
尿道下裂モデルラットの作製と原因遺伝子検索により、下記の3つの研究を実施した。
1) 尿道下裂モデルラットの作製：11週齢の妊娠Sprague-Dawleyラットに対し非ステロイド性抗アンドロゲン剤flutamide 7.5mgを、日数を調節して腹腔内投与することで、胎仔の尿道形成時期を特定した。すなわち、ラットの尿道形成は、妊娠15日目から始まり、妊娠17日目が最も重要な時期で、妊娠19日目には終了することが確認された。妊娠15日目と17日目と19日目に胎仔の陰茎を採取した。胎仔の陰茎の採取方法であるが、実体顕微鏡下に氷冷したリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に妊娠ラットから摘出した子宮をおき、羊膜を開け胎仔を取り出した。胎仔の性腺を実体顕微鏡で確認し雌雄を識別したのち、雄仔から陰茎を採取した。
2) 胎仔陰茎の遺伝子解析：胎仔陰茎からtotal RNAを抽出し、逆転写したcDNAを合成した。合成されたcDNAは、マイクロアレイチップにハイブリダイズさせスキャナーによる解析を行った。尿道形成に重要な遺伝子として、新規遺伝子(Pip: Prolactin-induced protein)を同定した。Pipの免疫染色による発現局在解析の結果、陰茎包皮の表皮基底層に発現を認めた。
3) パスウェイ解析：マイクロアレイの結果についてパスウェイ解析を行った。すなわち単独遺伝子一つ一つの評価ではなく、遺伝子群として遺伝子発現プロファイルの変化を捉えることを行った。その結果、FGFなど上流の調節因子によりGタンパクやチロシンキナーゼ型受容体のシグナル伝達経路が亢進していることが分かった。
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