Development of glycoconjugate microarray for the prediction of antibody mediated rejection in ABO incompatible kidney transplant

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K11195
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 田崎 正行 新潟大学, 医歯学総合病院, その他 (40571906)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 齋藤 和英 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (20262438) ; 舘野 浩章 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 上級主任研究員 (30450670) ; 牛木 隆志 新潟大学, 医歯学総合病院, 講師 (80579152)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 腎移植 / ABO血液型不適合

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は、『ABO血液型不適合腎移植前に抗体関連型拒絶反応発症の高リスク患者を識別する手法を確立し、移植腎機能喪失という最悪の事態を回避する』ことである。ヒト腎血管に最も多く発現しているPECAM1というタンパク質にABO糖鎖抗原が結合している我々の研究成果をもとに、PECAM1とA抗原、またはPECAM1とB抗原をHEK293細胞に発現させ、培養した分泌タンパクを固相化した糖タンパクアレイを使用し、健常者血清120検体の抗A抗体、抗B抗体の測定を終了した。二次抗体を使用しIgG、IgMの抗体を分けて測定した。赤血球を用いた従来の抗A抗体、抗B抗体測定結果と比較し、多くの検体が相関関係にあることが分かった。しかし、糖タンパクアレイと赤血球凝集反応との結果に解離がある検体もあり、抗A/B抗体の腎血管内皮細胞のABO抗原と赤血球のABO抗原への反応には差がある検体の存在も示唆された。
ヒトの正常腎組織検体をA、B、O型それぞれ同意書取得の元、採取し次年度の研究に使用できる体制を整えた。この組織を使用し、我々が使用している糖タンパクアレイのABO糖鎖抗原の構造と実際のヒト腎血管内皮細胞のABO糖鎖抗原の構造を比較する予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

実験順序は、計画と多少異なるが、全体としてはおおむね順調に進展している。

Strategy for Future Research Activity

今年度は、移植予定患者や移植をすでに受けた患者の血清検体を採取し、抗A抗体、抗B抗体の検討を行う。さらに、実際のヒト腎組織を可溶化し免疫沈降法でPECAM1を抽出し質量分析計を用いて詳細な糖鎖構造の解析を行う予定である。その結果により、我々の開発した糖タンパクアレイとの相違などを検討する予定である。
解析結果を分析し、ABO不適合腎移植の際に、拒絶反応の危険性を我々の開発した糖タンパクアレイが予測できるか検討する予定である。

Causes of Carryover

予定していた実験計画の順序が多少変更となったため、購入する物品や試薬に変更があり、そのために次年度使用額が生じた。