Development of glycoconjugate microarray for the prediction of antibody mediated rejection in ABO incompatible kidney transplant

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K11195
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 田崎 正行 新潟大学, 医歯学総合病院, 助教 (40571906)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 齋藤 和英 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (20262438) ; 舘野 浩章 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 上級主任研究員 (30450670) ; 牛木 隆志 新潟大学, 医歯学総合病院, 講師 (80579152)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 腎移植 / ABO不適合腎移植

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は、『ABO血液型不適合腎移植前に抗体関連型拒絶反応発症の高リスク患者を識別する手法を確立し、移植腎機能喪失という最悪の事態を回避する』ことである。ヒト腎血管に最も多く発現しているPECAM1というタンパク質にABO糖鎖抗原が結合している我々の研究成果をもとに、PECAM1とA抗原、またはPECAM1とB抗原をHEK293細胞に発現させ、培養した分泌タンパクを固相化した糖タンパクアレイを使用し、健常者血清120検体の抗A抗体、抗B抗体の測定を終了した。二次抗体を使用しIgG、IgMの抗体を分けて測定した。赤血球を用いた従来の抗A抗体、抗B抗体測定結果と比較し、多くの検体が相関関係にあることが分かった。しかし、糖タンパクアレイと赤血球凝集反応との結果に解離がある検体も複数あり、抗A/B抗体の腎血管内皮細胞のABO抗原と赤血球のABO抗原への反応には差がある検体の存在も示唆された。
次に、ヒトの正常腎組織検体と赤血球検体をA、B、O型それぞれ同意書取得ののち採取し、ヒト腎組織でABO抗原をもつPECAM1と赤血球でABO抗原をもつBAND3を免疫沈降法を用いて精製した。さらに、実際に腎移植を受ける予定のA型、B型、O型、AB型の腎不全患者血清と実際に腎移植を受けた患者の血清を収集し、次年度の実験の準備を整えた。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

新たな検体を採取するために他施設にも協力してもらう方針に変更したため、それぞれの施設での倫理委員会の受理に時間がかかった。おおむね目的検体は調達できている。また、免疫沈降の精度を追及するために何度も条件を検討したことで、予定よりやや遅れた形となった。

Strategy for Future Research Activity

次年度は、腎移植を受ける前の透析患者と実際に腎移植を受けた患者の検体を収集し糖タンパクアレイと赤血球凝集反応で抗A抗体、抗B抗体を解析し、最終的な結論をだす。
また、質量分析計を使用し、ヒト腎組織のPECAM1と赤血球のBand3のABO抗原に差がないか、また研究で使用している糖タンパクアレイのABO抗原と差がないかなど検討する。

Causes of Carryover

実験計画がやや遅れた結果、今年度する予定だった研究ができなかったことにより、当該助成金が生じた。これらは、次年度の研究で予定しており当該助成金を使用する。