2017 Fiscal Year Research-status Report
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17K11527
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
永野 裕介 北海道大学, 大学病院, 医員 (30600168)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
テルカウィ アラー 北海道大学, 医学研究院, 助教 (00723074)
角家 健 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任講師 (30374276)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 末梢神経損傷 / 軸索再生 / マクロファージ / シュワン細胞 / 線維芽細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、マクロファージ、繊維芽細胞の亜型による軸索再生効果の違いを明らかにし、軸索再生に最適な細胞を、シュワン細胞も含めて複数種移植することによって、末梢神経軸索再生に有効な複合細胞治療方法を確立することである。１年目である今年度の目的は、M2マクロファージの軸索再生に関する役割を、M2マクロファージの移植と死滅によって明らかにすること、M2マクロファージのおよび各種神経組織からの線維芽細胞作成方法の確立の２つである。RFP陽性Lewisラットの腹腔内にThioglycolateを注射して5日後に未分化マクロファージを単離し、IL4添加による培養を２日間して、RFP陽性M2マクロファージを作成した。作成したM2マクロファージ５０万個を、われわれが開発したラット坐骨神経の無細胞モデルに移植し、２週間後にNeurofilamentに対する免疫染色で再生軸索を定量したところ、M2マクロファージ移植群は移植なし群に比べて有意に軸索再生が促進していた。また、動員されるシュワン細胞数も有意に増えていた。 これらの点から、M2マクロファージの軸索再生効果が明らかになり、その機序の一部はシュワン細胞の遊走能亢進が考えられた。一方、M2マクロファージの死滅に関しては、Mannosylated Clodronate liposomesによって、M2マクロファージが選択的に死滅可能であることを、in vitroおよびin vivoで確認し、現在、その軸索再生に及ぼす影響を解析中である。線維芽細胞に関しては、神経上膜から採取、調整する方法を確立したが、神経実質からの採取には、さらなる条件検討が必要であることが明らかになった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究の目的は、マクロファージ、繊維芽細胞の亜型による軸索再生効果の違いを明らかにし、軸索再生に最適な細胞を、シュワン細胞も含めて複数種移植することによって、末梢神経軸索再生に有効な複合細胞治療方法を確立することである。１年目である今年度の目的は、M2マクロファージの軸索再生に関する役割を、M2マクロファージの移植と死滅によって明らかにすること、M2マクロファージのおよび各種神経組織からの線維芽細胞作成方法の確立の２つである。RFP陽性Lewisラットの腹腔内にThioglycolateを注射して5日後に未分化マクロファージを単離し、IL4添加による培養を２日間して、RFP陽性M2マクロファージを作成した。作成したM2マクロファージ５０万個を、われわれが開発したラット坐骨神経の無細胞モデルに移植し、２週間後にNeurofilamentに対する免疫染色で再生軸索を定量したところ、M2マクロファージ移植群は移植なし群に比べて有意に軸索再生が促進していた。また、動員されるシュワン細胞数も有意に増えていた。 これらの点から、M2マクロファージの軸索再生効果が明らかになり、その機序の一部はシュワン細胞の遊走能亢進が考えられた。一方、M2マクロファージの死滅に関しては、Mannosylated Clodronate liposomesによって、M2マクロファージが選択的に死滅可能であることを、in vitroおよびin vivoで確認し、現在、その軸索再生に及ぼす影響を解析中である。線維芽細胞に関しては、神経上膜から採取、調整する方法を確立したが、神経実質からの採取には、さらなる条件検討が必要であることが明らかになった。
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| Strategy for Future Research Activity |
M2マクロファージを選択的に死滅させた場合の軸索再生に対する効果、同種M2マクロファージや各種線維芽細胞の軸索再生効果、阻害効果を明らかにして、軸索再生に最適な細胞の詳細をさらに明らかにしていく。また、各種細胞の軸索再生効果、阻害効果の機序解明を感覚神経や運動神経との共培養系によって検討していく。これらの点を明らかにすることによって、複合細胞治療に使用すべき細胞種の詳細が明らかになる予定である。
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| Causes of Carryover |
既存の物品を使用したため新たな購入が少なくなった。追加購入に使用する。発表学会、論文などの費用として使用する。
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Research Products
(4 results)
