2017 Fiscal Year Research-status Report
脂肪幹細胞の低酸素応答メカニズムの解明と新たな体外増幅法の開発
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17K11558
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
覚道 奈津子 関西医科大学, 医学部, 講師 (00509490)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
楠本 健司 関西医科大学, 医学部, 教授 (20161630)
森本 尚樹 関西医科大学, 医学部, 准教授 (40378641)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 低酸素 / 脂肪幹細胞 / 増殖 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
低酸素を用いた培養は，短時間かつ簡便に移植幹細胞の組織再生能力を増強することのできる有用な方法で、特殊な技術を必要とせず、脂肪幹細胞を用いた皮膚・血管再生医療の臨床応用に大いに貢献できると考えられる。また、低酸素下での制御機構を解明することにより、虚血・低酸素下における移植された脂肪幹細胞の未知なる動態の一面を明らかにすることで、脂肪幹細胞の再生医療研究に新しい発展を導く基盤となる。
脂肪幹細胞の低酸素下での増殖能・分化能・遊走能、血管新生能の変化を以下の方法で検討した。ヒト脂肪組織を採取後、十分に洗浄し，コラゲナーゼタイプⅡにて40分40℃にて震盪させ、組織を消化する。消化終了後，基礎培地を加えて1,600rpm 3minにて遠心分離を行い、3回十分に洗浄した後、下部に沈殿した細胞ペレットを新しい基礎培地に移して攪拌し、細胞群である脂肪幹細胞を得た。脂肪幹細胞の増殖度をMTTアッセイ、DNA合成能をBrdU取り込みアッセイで検討をおこない、低酸素環境で脂肪幹細胞が有意に増殖促進することが明らかになった。また、培地中に産生される血管新生因子をELISAで測定し、mRNAの発現をリアルタイムRT-PCRで解析したところ、血管内皮細胞増殖因子（VEGF)の産生とmRNAの発現が低酸素環境で有意に促進していた。転写因子である低酸素誘導因子(Hypoxia Inducible Factor、HIF）の発現をウェスタンブロッティングで測定したところ、低酸素48時間で発現亢進がみられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
申請書の計画書にそった内容を、おおむね順調に遂行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
低酸素環境での脂肪幹細胞の遺伝子発現の変化について、リアルタイムRT-PCRアレイによる血管新生関連増殖因子の網羅的な変化の解析を行いたい。さらには、低酸素環境でのERK1/2、JNK、p38、Aktのリン酸化の有無をウェスタンブロッティングで測定し、各経路の阻害剤を培地に添加して、その影響を評価する予定である。
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| Causes of Carryover |
2017年度に行く予定だった国際脂肪幹細胞学会（IFATS)に他業務の都合で参加できなかったため。2018年度に参加し、発表予定。
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