2018 Fiscal Year Research-status Report
脂肪幹細胞の低酸素応答メカニズムの解明と新たな体外増幅法の開発
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17K11558
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
覚道 奈津子 関西医科大学, 医学部, 講師 (00509490)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
楠本 健司 関西医科大学, 医学部, 教授 (20161630)
森本 尚樹 関西医科大学, 医学部, 准教授 (40378641)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 脂肪幹細胞 / 低酸素 / 増殖 / 血管新生 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
脂肪幹細胞の低酸素下での増殖能・分化能・遊走能、血管新生能の変化を以下の方法で検討した。手術の余剰組織から得られた1g前後のヒト脂肪組織を採取後、十分に洗浄し，コラゲナーゼタイプⅡにて40分40℃にて震盪させ、組織を消化する。消化終了後，基礎培地を加えて1,600rpm 3minにて遠心分離を行い、下部に沈殿した細胞ペレットを新しい基礎培地に移して攪拌し、3回洗浄した細胞群を脂肪幹細胞とする。なお、この方法で得た脂肪幹細胞は、骨・軟骨・脂肪へ分化する、多分化能を有することが明らかになっている。
増殖度：MTTアッセイ、DNA合成能（BrdU取り込みアッセイ）により低酸素状態で増殖促進を確認した。
血管新生効果：リアルタイムRT-PCRアレイによる血管新生関連増殖因子mRNAの発現（VEGF,FGF-2)、血管新生因子の産生能をELISAで測定し、促進効果を確かめた。
HIF-1αの発現、ERK1/2、JNK、p38、Aktのリン酸化の有無をウェスタンブロッティングで測定した。
n-propyl gallate (nPG)は、食品の酸化防止剤として使用される食品添加物の一つだが、近年、低酸素誘導因子活性化剤としての働きも持つことが発見された。このことから、もしnPG添加により脂肪幹細胞が活性化すれば、低酸素培養を行わなくても、低酸素下で培養した状態と同じように幹細胞の機能が亢進し、新たな体外増幅法となりえることが予測される。本年度の実験により、nPG添加で脂肪幹細胞の低酸素誘導因子(Hypoxia Inducible Factor、HIF)-1αが活性化されること、かつ増殖能が促進することを明らかにした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
申請内容の研究課題内容を行い、一定の結果が得られている。
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| Strategy for Future Research Activity |
脂肪幹細胞における低酸素誘導因子活性化剤 (nPG)の増殖・血管新生因子産生効果の検討
脂肪幹細胞の培地にnPGを段階希釈（0,5,10,20,100nM）して１～4日間培養し、WST-8、BrdUで細胞増殖度を測定する。添加時のERK1/2、Akt、JNK、p38のリン酸化の有無を免疫ブロッティングで測定し、nPG存在下でERK阻害剤、p38阻害剤、Akt阻害剤を培地に添加して、その影響を検討していく予定としている。
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| Causes of Carryover |
物品が予定額より安く調達できたため。
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