2018 Fiscal Year Research-status Report
骨形成作用を有する抗DKK-1抗体の効果メカニズムの解明
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17K11753
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
井上 美穂 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(歯学域), 助教 (20271059)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
井上 正久 徳島文理大学, 薬学部, 教授 (20223274)
宮城 麻友 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(歯学域), 助教 (20625719)
松香 芳三 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(歯学域), 教授 (90243477)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 抗DKK-1抗体 / TNF-α / 骨粗しょう症モデルマウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
抗DKK-1抗体の効果メカニズムを解明することで、新たな骨粗鬆症治療薬、骨形成、骨補填剤としての可能性を探索する。骨代謝に関連するWnt/βカテニンシグナルは、骨細胞、骨芽細胞から産生されるDKK1により阻害され、骨芽細胞の分化抑制、破骨細胞の形成促進が報告されている。抗DKK-1抗体はWnt/βカテニンシグナルを阻害しないため、骨形成作用を有すると考えられる。しかしながら、抗DKK-1抗体の骨髄でのメカニズムについてはあまり知られていないのが現状である。
本年度は、マウス長管骨の骨髄から分離培養した骨髄細胞を用いて、細胞増殖能、分化能を検討した。細胞増殖能においては、MTSアッセイにて検討し、抗DKK-1抗体投与群、TNF-α投与群、抗DKK-1抗体＋TNF-α投与群、コントロール群において、有意な差は認められなかった。細胞分化能においては、アルカリフォスファターゼ活性、アリザリンレッド染色について検討したところ、抗DKK-1抗体投与群はコントロール群と差は認められなかったが、TNF-α投与群、抗DKK-1抗体＋TNF-α投与群においては、活性が抑制される傾向にあり、TNF-α投与によって分化が抑えられることが示唆された。また、骨粗しょう症モデルマウスを作製し、マイクロCTを用いて骨量解析を行ったところ、抗DKK-1抗体投与群において、骨量の減少は認められなかった。組織学的検討においても、コントロールと同様の骨量を認めた。
現在は、骨粗しょう症モデルマウスを抜歯した後の顎骨の変化、骨形成、骨破壊について検討している。また、骨髄培養細胞からRNAを抽出し、定量性RT－PCR法を用いて、炎症性サイトカイン、幹細胞化の指標となる遺伝子についても検討している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は骨粗しょう症モデルマウスを作製し、形態学的、組織学的検討を行った。μCTを用いて、形態学的検討、また、骨量計測も行った。組織学的には、ヘマトキシリンーエオジン染色、破骨細胞を染色するTRAP染色、各種免疫染色を行っている。また、細胞分化能について、アリザリンレッド染色、RNA抽出、定量Real time PCRの検討も行っている。現在はこれらをまとめて学会発表の準備を進めている。
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| Strategy for Future Research Activity |
細胞培養実験においては、炎症性サイトカイン、幹細胞化の指標となるRNA、タンパクについて、抗DKK-1抗体、TNF-αの影響についてさらに検討を進めていく。また、シグナル伝達経路についても検討を行っていく。
動物実験においては、骨粗しょう症モデルマウス、顎骨壊死マウスを作製し、抗DKK-1抗体がどのように作用するかを検討していく。
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| Causes of Carryover |
平成30年度は国内学会に参加予定であったが、予定が合わず断念したため。今年度は、国内学会発表、論文投稿を予定している。
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