2017 Fiscal Year Research-status Report
HLAハプロタイプホモ歯髄細胞およびiPS細胞由来エクソソームの解析
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17K11830
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| Research Institution | Gifu University |
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Principal Investigator |
川口 知子 (武田知子) 岐阜大学, 医学部附属病院, 医員 (30509815)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
飯田 一規 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 助教 (30585237)
柴田 敏之 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 教授 (50226172)
畠山 大二郎 岐阜大学, 医学部附属病院, 講師 (60377653)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 歯髄細胞 / エクソソーム / ハプロタイプホモ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々が樹立・保有する約300人分のヒト智歯歯髄細胞(DPC)に含まれていた３種類のHLAハプロタイプホモ(HHH)細胞は日本人の約25％に移植適合を示す。我々は、これらのHHH細胞からiPS細胞を誘導し、再生医療資源として利用するための研究を続けている。近年、間葉系細胞の培養上清中に含まれる小胞「エクソソーム」が、様々な生理活性を示すことがわかってきた。しかしエクソソームにもHLA分子が含まれている可能性があり、患者の体内でHLA分子の抗体が作られると、免疫的なエクソソームの排除を免れない。また最近、単離されたエクソソームには、血清由来成分やフィーダー細胞由来の成分などが含まれているという報告がなされているので、３種類のHHH-歯髄細胞を無血清で培養したものとHHH-iPS細胞をフィーダー細胞なし無血清で培養した細胞の培養上清中に含まれるエクソソームを精製し、免疫的なエクソソームの排除を起こさないエクソソームの安定した精製技術を開発を目指す。
そこで、今年度は、これまでに研究協力に同意の得られた保有する３種類のHHH-歯髄細胞を、すでに報告済みの無血清の培養条件のもとで準備する。それから３種類のHHH-歯髄細胞から別々の方法でHHH-iPS細胞を誘導し、それをフィーダー細胞なし無血清で培養した細胞も準備する。準備された各々の培養上清中に含まれるエクソソームを超遠心法およびキットを用いた方法で精製し、精製されたエクソソームの性質についてサイズや発現タンパク等を比較・精査した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
HHH-歯髄細胞を無血清で培養した培養上清中に含まれるエクソソームを精製する予定であったが、HHH-歯髄細胞を培養する予定にしていた無血清培地の納品が大幅に遅れており、納品を待ちながら代替えを検討しているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
前年に続き、準備された各培養条件下で継代されたHHH-DPCおよびHHH-iPS細胞を用いて、エクソソームを精製し、エクソソームの収量を増大するために、それに適した分子経路を特定し、それらの因子を適切に制御する技術を探索する。
また、最近の研究から間葉系幹細胞の分泌するエクソソームが様々な疾患（心筋障害、腎疾患や脊髄損傷など）に対して治療効果を示すことがわかってきているため、間葉系細胞であるDPCおよびiPS細胞の分泌するエクソソームでも同様の治療効果があるか、また安全性について確認する。
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