2017 Fiscal Year Research-status Report
Relationship between SPARC (osteonectin) and recurrence of malignant tumor
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17K11885
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| Research Institution | Ohu University |
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Principal Investigator |
鈴木 厚子 奥羽大学, 歯学部, 講師 (90405986)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
前田 豊信 奥羽大学, 歯学部, 准教授 (10382756)
高田 訓 奥羽大学, 歯学部, 教授 (40254875)
加藤 靖正 奥羽大学, 歯学部, 教授 (50214408)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | SPARC |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（１）がん幹細胞の増減にSPARCが及ぼす影響の解明 ⅰ）がん幹細胞増加におけるSPARCの影響について扁平上皮癌、悪性黒色腫、骨肉腫、マウス扁平上皮癌などの細胞株に、ゲノム編集によりSPARCノックアウト株とテトラサイクリン誘導発現（Tet-on)株の樹立にやや遅れが生じたためそれ以降の予定に遅延が生じている、樹立できた細胞については、低酸素及び、酸化ストレス条件下での長期培養を行っている。ヌ－ドマウスを用いての皮下移植で造腫瘍性を評価する項目については、移植後の時間経過が予定より長くなっているため、今後も経過観察をつづける ⅱ）がん幹細胞の分化におけるSPARCの影響については、上記の細胞集団をドキシサイクリン（Dox）によってSPARC発現を誘導させる、またはGFP-SPARCを添加することによるがん幹細胞の減少が起こるかを現在解析中である。
（２）SPARC発現が、栄養嗜好に与える影響の解析 糖代謝の実態の解析についてエネルギ－代謝におけるミトコンドリア依存度にSPARCが寄与するか否かを検証中であり、また、培地中の糖・アミノ酸欠乏状態から、グルコ－ス（２－NBDG）の添加による糖の取り込みの評価について現在進行中である。その後、アセチルCoA量・α－ケトグルタル酸・イソクエン酸量の蛍光測定、グルタミン・シスチン・アルギニンなどの添加培養後の残存アミノ酸量を測定し、ミトコンドリア依存度を評価する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
がん幹細胞増加におけるSPARCの影響について扁平上皮癌、悪性黒色腫、骨肉腫、マウス扁平上皮癌などの細胞株に、ゲノム編集によりSPARCノックアウト株とテトラサイクリン誘導発現（Tet-on)株の樹立に遅れが生じた。それらの影響で、計画の一部に予定より遅れが生じた。
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| Strategy for Future Research Activity |
（１）がん幹細胞の増減にSPARCが及ぼす影響の解明につては、扁平上皮癌、悪性黒色腫、骨肉腫、マウス扁平上皮癌などの細胞株に、ゲノム編集によりSPARCノックアウト株とテトラサイクリン誘導発現（Tet-on)株の樹立については、対称を絞り込み、安定した細胞株を選択する。平成29年度計画の一部であるヌ－ドマウスの皮下移植については、再発に関わるがん幹細胞の性質から、平成30年度以降の評価が必要となる。ここで得られた試料を用いて免疫組織的解析を行う。また、ここから得られた結果をもとに、分担研究者（加藤）が作成したSPARCノックアウトマウス（C57BL/6由来）への同種間移植実験で、造腫瘍性を評価する。
（２）SPARC発現が、栄養嗜好に与える影響の解析では、ⅰ）SPARCが、mTORに及ぼす影響は、平成29年度計画（２）から得られた結果からSPARCが、アミノ酸トランスポ－タ－下流シグナルであるmTORC1の活性化を起こしているかについて解析を行う。エネルギ－代謝の変化がmTORを介した細胞分裂制御につながるのかが解明される。 ⅱ）高血糖下でのSPARCの影響の解析では、平成29年度計画（１）で樹立した細胞を、C57BL/6由来のob/ob、db/dbマウスに移植することで、造腫瘍性とともにがん幹細胞分化における血糖、またleptinとSPARCの影響を総合的に解析する。
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| Causes of Carryover |
がん幹細胞増加におけるSPARCの影響についてヒト扁平上皮癌、悪性黒色腫、骨肉腫、マウス扁平上皮癌などの細胞株に、ゲノム編集によりSPARCノックアウト株とテトラサイクリン誘導発現（Tet-on）株の樹立に時間がかかり、その後の予定していた実験に影響が出てしまい、実験の遅れがそのまま使用額の減少につながった。本年度は、予定していた実験に追いつく様に研究を進める。
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