2021 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis and identification of microRNAs and target genes related to bone formation and vascular calcification
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17K11967
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| Research Institution | Kyushu Dental College |
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Principal Investigator |
藤田 優子 九州歯科大学, 歯学部, 助教 (90514670)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
牧 憲司 九州歯科大学, 歯学部, 教授 (60209400)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | microRNA / マイクロアレイ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでの研究結果から骨・軟骨組織の石灰化にはメカニカルストレスなどによる血管新生とそれを制御する因子が必要であることを明らかにしている。そこで昨年度は、血管新生因子を標的としたmicroRNAが軟骨の血管新生と石灰化を制御するという仮説のもとに、軟骨特異的に発現する血管新生因子標的microRNAを同定し、in vivo、in vitroの両方向からその機能を解析した。生後3週齢のラット10匹に固形食（コントロール群）もしくは粉末食（実験群）を8週間与えて飼育し、実験期間終了後、深麻酔下で安楽死させ、ただちにすべてのラットの咬筋（浅層、深層）を摘出した。摘出した右側の咬筋の一部でHE染色標本を作製し、残りのサンプルでmicroRNAを含むtotalRNAの抽出を行った。Total RNAのサンプルから、microRNAおよびDNAマイクロアレイ解析を行い、信頼性のあるmicroRNAとmRNAのみを抽出した。さらに実験群とコントロール群間でt-testを行い、p値が0.05未満で発現値の変動倍率が2以上もしくは1/2以下のmicroRNA(浅層；21種、深層；11種)とmRNA(浅層；555種、深層；155)を抽出した。HE染色標本から、筋線維の平均横断面積と直径を測定し、実験群とコントロール群間における平均値の比較を行った。変動miRNAと変動ｍRNAの発現値が逆相関関係にあるものを抽出し、公的データベースを使用してmiRNAのターゲットmRNAの予測を行った。Gene Ontology 頻度解析、KEGG Pathway頻度・挙動解析を行い、さらなるmiRNA-mRNAの絞込みを行った。マイクロアレイ解析の結果の妥当性を証明するため、miRNAと標的mRNAのリアルタイムPCR解析を行った。これらのデータをまとめて論文発表を行う予定である。
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