2018 Fiscal Year Research-status Report
Identification of Amelogenin active sites on enamel remineralization
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17K11969
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| Research Institution | Health Sciences University of Hokkaido |
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Principal Investigator |
齊藤 正人 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (50337036)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
谷村 明彦 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (70217149)
安彦 善裕 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (90260819)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | アメロジェニン / EMD |
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| Outline of Annual Research Achievements |
エナメル質の再石灰化は歯科臨床上、重要な研究テーマであり、これまで様々な研究が行われてきた。CaとP が豊富な条件下でフッ化物は脱灰エナメル質を再石灰化するが、フッ化物と共にアメロジェニンタンパクを添加することでエナメルの結晶構造が緊密になることが報告されている。本研究ではヒトアメロジェニンのN末端、中間部、そしてC末端それぞれの領域のリコンビナントタンパクを作製し、エナメル質石灰化実験を行うことでアメロジェニンの石灰化活性領域を特定し、さらには石灰化の活性領域のペプチドを作製し、将来の臨床応用に活用することを目的としている。
2018年度は、歯原性上皮細胞における石灰化誘導能の解析を行った。石灰化誘導能の解析には、アリザリンレッドS染色を行う。MC3T3-E1細胞とアメロジェニンの放出をみるマラッセ上皮遺残を共培養し、30日間培養した。マラッセ上皮遺残細胞は石灰化抑制をすることが明らかになった。
EMDによる抜去歯エナメル質の石灰化
30%リン酸溶液にて60秒脱灰した抜去歯エナメル質に、石灰化誘導培地（CaCl2:2.58mM、KCl:180mM、KPO4:1.55mM、Tris-HCl:50mM、pH7.60）にアメロジェニンを各種濃度で（0.1, 0.25, 0.5%）添加し16時間浸漬した。浸漬した歯牙は、石灰化物を電界放出型走査電子顕微鏡（FE-SEM）で形態解析およびマッピング、X線回折装置（RINT2000）による結晶構造解析およびラマン解析を行った。EMD添加石灰化誘導培地は石灰化の結晶構造を変化させ、密度の高い針状構造を示すことが明らかになった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
特に問題なく、予定通りに進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
①ヒトリコンビナントアメロジェニン合成ペプチドの作製
3種類のアメロジェニンフラグメントの研究結果から石灰化誘導部位の検討および決定を行う。ヒトリコンビナントアメロジェニン合成ペプチドはFmoc固相合成法により作製し、HPLCおよびマススペクトルデータにより純度の確認をする。
②歯原性上皮細胞におけるヒトリコンビナントアメロジェニン合成ペプチド石灰化誘導能の評価
HAT-7およびSF2細胞に、ヒトリコンビナントアメロジェニン合成ペプチドを添加、培養しアリザリンレッドS染色および ALP assay を行う。
③抜去歯牙におけるリコンビナント・ヒトアメロジェニン合成ペプチドの石灰化
脱灰した抜去歯エナメル質はヒトリコンビナントアメロジェニン合成ペプチドを添加した石灰化誘導培地に浸漬し、脱灰エナメル質の石灰化能を形態解析、結晶構造解析および力学物性の測定を行う。
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| Causes of Carryover |
抗体の販売金額に達しないため、繰り越しとした。
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