2017 Fiscal Year Research-status Report
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17K12059
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
有川 量崇 日本大学, 松戸歯学部, 准教授 (50318325)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
Bhawal Ujjal 日本大学, 松戸歯学部, 助教 (50433339)
田口 千恵子 日本大学, 松戸歯学部, 助手(専任扱) (80434091)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 唾液 / 唾液腺 / 老化 / 加齢 / 時計遺伝子 / DEC1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は唾液腺の老化における唾液分泌障害に対するDEC１の関与を検討することとした。生後３ヵ月齢、２４ヵ月齢のC５７BL６およびDEC１ノックアウトマウスの唾液腺（顎下腺・舌下腺）を採取し、RNAおよびタンパクを抽出した。採取した唾液腺組織からRNAをmiRNeasy Mini Kit (Qiagen) を用いて抽出し、DNAマイクロアレイおよびmiRNAマイクロアレイを用いて網羅的遺伝子発現解析[GeneSpring解析ソフト(Agilent)]を行った。さらに、マイクロアレイで得られたデータはIPA (Ingenuity Pathway Analysis)解析から予測される生物学的過程、転写経路およびネットワークの探索を行った。遺伝子(S100A８, AQP５, MUC７, MUC７, HIN３, STATH, MYB, NFIB等) およびmiRNA (miR-15a, miR-21, miR-Let７c, miR-１４３, miR-１４６b, miR-１５０, miR-３７８a) が候補 遺伝子およびmiRNAとして同定された。特異的TaqMan®プローブを用いてQuantStudio ６ Flexリアルタイム PCR システム(Applied Biosystems)によりmRNAおよびmiRNAの定量化した。また、ウェスタンブロッティング法によるタンパク質の検討は、ImageQuant Las ４０００ Miniで観察した。DNAマイクロアレイ解析により同定された遺伝子(MUC, AQP５等)の免疫組織化学染色を行った。老化モデルマウスの唾液腺を用いて網羅的遺伝子発現解析及びmicroRNA発現解析により、唾液腺の老化のメカニズムを明らかにした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度は、唾液腺（顎下腺・舌下腺）における老齢化過程のメカニズムの解明することを目的とし、まずはDEC1ノックアウトマウスを作成し、DNAマイクロアレイおよびmiRNAマイクロアレイによる網羅的遺伝子発現解析、リアルタイムPCR法によるmRNAおよびmiRNAの定量、ウェスタンブロッティング法によるタンパクの検討を行う予定であった。ほぼ順調に進んでいる。
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| Strategy for Future Research Activity |
in vivo研究結果から網羅的遺伝子及びmicroRNA発現解析により同定された遺伝子及びmiRNAを臨床研究として、ヒト唾液サンプルを用いて検討する予定である。高齢者のサンプルに関しては、現在100歳健診を実施しており、そのサンプルを使用する予定である。まだ動物実験においては、ルシフェラーゼアッセイ、リアルタイムPCR法によるmRNAおよびmiRNAの定量、ウェスタンブロッティング法によるタンパクの検討、クロマチン免疫沈降法 (ChIP) による転写因子結合の解析を進めていく予定である。
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Research Products
(8 results)
