非小細胞肺癌における新規バイオマーカーの同定と機能解析

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K15009
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 野口 智史 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (60732807)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 非小細胞肺癌 / バイオマーカー

Outline of Annual Research Achievements

公共データベースを用いて、非小細胞肺癌のバイオマーカー候補を複数抽出した。その一つとしてCRIP1（Cysteine-Rich Instestinal Protein 1）に注目した。CRIP1はLIM/double-zinc fingerタンパクファミリーに属するタンパクであり、actin cytoskeletonと相互作用するアダプター分子として機能し、細胞の増殖や分化にも関与すると言われているがその機能はほとんど分かっていない。一部の癌種で過剰発現や予後との関連が示されているが肺癌での研究はなされていない。
まずCRIP1発現をRNAおよびタンパクレベルで解析したところ、正常気道/肺胞上皮細胞ではほとんど発現しておらず、一部の非小細胞肺癌細胞株で高発現していた。H358、H1437という2種類のヒト肺癌細胞株を用いてCRIP1をsiRNAでノックダウンし、細胞増殖アッセイを行ったところ、CRIP1ノックダウン群で細胞増殖が抑制された。細胞周期解析・アポトーシスアッセイでは有意差が見られなかった。次に、CRIP1 miRNA発現ベクターを作成し、恒常的にノックダウンする系を確立し、colony formation assayを行ったが、ノックダウン群でコロニー形成が抑制される傾向があったが有意差は認めなかった。
また、306サンプルからなる肺癌の組織マイクロアレイを用いて、CRIP1の免疫染色を行ったところ、低発現から高発現まで様々な発現パターンを示し、組織ごとでは扁平上皮癌や大細胞癌よりも腺癌で発現が高かった。正常肺の肺胞上皮では発現を認めなかった。喫煙歴や肺癌のステージごとの発現差はなく、また生存解析でも高発現群と低発現群とで有意差を認めなかった。
以上よりCRIP1は肺癌特異的に発現するバイオマーカーとなりえるが、強いoncogenic functionは有していないと考えられた。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

当初肺癌のバイオマーカー候補として挙げた遺伝子がそれほど強いoncogenic functionを有していないことが分かり、現在他の候補遺伝子を解析中である。

Strategy for Future Research Activity

公共データベースを用いて、非小細胞肺癌の新規バイオマーカー候補が他にも複数抽出されており、それらの機能解析を今後行っていく方針。具体的にはsiRNAまたはmiRNAを用いたloss of functionモデルで、肺癌細胞株で細胞増殖、遊走、浸潤の解析、in vivoではヌードマウスへの皮下注射、尾静脈注射で腫瘍形成能、転移能を評価する。また組織マイクロアレイを用いて、候補遺伝子のタンパク発現レベルと臨床病理学的パラメータとの相関、生存解析を行う。

Causes of Carryover

有意な実験結果が得られず、当初予想していたin vitroおよびマウス実験を行うことができなかったためため、次年度以降に繰り越す。