2018 Fiscal Year Annual Research Report
Development of profiling method for O-glycopeptides
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17K15097
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| Research Institution | Japanese Foundation for Cancer Research |
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Principal Investigator |
芳賀 淑美 公益財団法人がん研究会, がんプレシジョン医療研究センター がんオーダーメイド医療開発プロジェクト, 研究員 (40525789)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 糖鎖 / 質量分析 / グライコプロテオミクス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、微量の生体試料中のO型糖鎖結合部位を網羅的に定量プロファイル解析する技術の開発に基づく、がん特異的O型糖鎖修飾タンパク質の同定と分子生物学的機能解明を目的としている。
前年度までに至適条件検討を行った基盤技術である新規O型糖タンパク質定量プロファイル法を用いて様々なモデルタンパク質の分析を行った。モデルタンパク質としてO型糖鎖修飾部位を複数持つことが知られているウシフェツインを用いた実験では、非常に高い糖ペプチドの濃縮効率を達成し、未報告の新規O型糖鎖付加部位を複数同定することができた。本手法をより複雑な試料である培養細胞抽出液に適用するために、ペプチドのラベル化およびストレプトアビジンビーズを用いたラベル化ペプチドの濃縮ステップの改善を行った。ストレプトアビジン、およびその誘導体を固相化した種々の市販のビーズを検討した結果、疎水性ビーズにストレプトアビジンを固相化したビーズが最も濃縮効率が良いことが明らかとなった。
開発した手法を使用し、子宮頸がん細胞株や肺がん細胞株、前立腺がん細胞株など、様々な癌細胞株のO型糖鎖修飾タンパク質の網羅的解析を行った。解析の結果、ムチンやNF-κBなど、がんに関連する分子に実際にO型糖鎖修飾が起こっていることを確認した。さらにHeLa細胞抽出物を用いた解析では、既存の手法で解析した場合と比較して5倍ものO型糖鎖付加部位を同定することに成功した。生体サンプル内で存在量の少ないO型糖タンパク質を網羅的に捕捉する新規技術の確立に向けて順調に進展している。
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Research Products
(3 results)
