2019 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidation of phosphorylase-dependent metabolisms of plant and animal polysaccharides in higher fungi
Project/Area Number |
17K15251
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Research Institution | Nippon Veterinary and Life Science University |
Principal Investigator |
知久 和寛 日本獣医生命科学大学, 応用生命科学部, 講師 (30711618)
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Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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Keywords | 高等真菌 / キノコ / オリゴ糖 / 酵素 / 代謝 |
Outline of Annual Research Achievements |
高等菌類であるキノコは,地球上の生態系における炭素循環システムの維持に大きく貢献しており,植物性・動物性多糖の代謝機能に優れた微生物種の一つである。キノコはこれら多糖を効率的に分解・資化するための多様な糖関連酵素を保有していることが知られているものの,その細胞内代謝に関わる酵素についてはあまり解析が進められていない。そこで本研究では,キノコが保有する植物性・動物性多糖の細胞内代謝に関与する酵素群、特に効率的なエネルギー消費を特徴とする加リン酸分解酵素(ホスホリラーゼ)依存型新規代謝機構を明らかにすることを目的にしている。 研究前年度に引き続き,申請者がキノコの菌糸体細胞内成分より見出した,植物性・動物性多糖の分解産物として得られうるオリゴ糖の細胞内分解に寄与する酵素群の遺伝子クローニングとキノコを用いた酵素遺伝子の発現系の構築に着手した。 精製した酵素タンパク質から得られる部分アミノ酸配列情報と酵素の基質特異性もしくはCAZyデータベースより属すると考えられた糖加水分解酵素ファミリーや糖転移酵素ファミリーからアミノ酸配列の相同性を元に設計したプライマーを用いて、キノコよりゲノムDNAを抽出した。ゲノムDNAを鋳型として設計したプライマーとともにPCRを行い、酵素遺伝子をコードする塩基配列の一部を取得した。得られた塩基配列情報から他の酵素遺伝子との相同性を調べた結果、予想された糖加水分解酵素ファミリーや糖転移酵素ファミリーに属する糖質関連酵素とは違うファミリーに属する酵素遺伝子や機能未知遺伝子を複数取得することができた。現在、取得できた機能未知遺伝子群を中心にアダプターPCR法などにより酵素遺伝子の全長配列の取得を行っている。
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Research Products
(1 results)