2018 Fiscal Year Research-status Report
AMPKがSRSF1を介して選択的スプライシングに及ぼす影響の解析
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17K15273
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| Research Institution | Tokyo University of Agriculture |
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Principal Investigator |
鈴木 司 東京農業大学, 応用生物科学部, 助教 (20714588)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | AMPK / SRSF1 / 選択的スプライシング |
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| Outline of Annual Research Achievements |
SRSF1タンパク質はpre-mRNAのエクソン配列と結合し、スプライソソームを正しいスプライス部位に引き寄せて切断させる。そのため、標的エクソン配列との結合を変化させるSRSF1タンパク質の翻訳後修飾は、標的エクソンの選択的スプライシングの制御につながるため重要である。
本研究では、選択的スプライシングを制御するSRSF1タンパク質が、細胞内のエネルギー恒常性を制御するAMPKキナーゼによってリン酸化される可能性が示されたことから、AMPKキナーゼがSRSF1タンパク質をリン酸化し、標的のエクソン配列との結合が変化することで、その選択的スプライシングに及ぼす影響を明らかにする。平成29年度までに、AMPKキナーゼがSRSF1タンパク質をリン酸化することをリン酸化特異的抗体を用いて明らかとし、SRSF1タンパク質がAMPKキナーゼの新たな基質であることを示した。
また、前年度までにSRSF1タンパク質と結合するモチーフ配列を有するRNAを人工的に作成し、これを用いて結合性の解析をin vitroにおいて行ったところSRSF1タンパク質のリン酸化修飾がRNAとの結合性を低下させることが示された。そこで平成30年度においては、AMPKが実際にSRSF1タンパク質を介して選択的スプライシングに影響を及ぼすか解析を行った。その結果、SRSF1タンパク質がターゲットとする複数のmRNAにおいて、AMPK活性の変化によって選択的スプライシングの変化が観察された。
以上のことから、AMPKキナーゼはSRSF1タンパク質のリン酸化を介して選択的スプライシングに影響を及ぼす事が示された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の計画通り、これまでにAMPKによるSRSF1タンパク質のリン酸化修飾が起きることを明らかとし、さらにそのリン酸化修飾がRNAとの結合性に変化を及ぼすことも示すことができた。また、細胞内においてもSRSF1タンパク質が標的とするｍRNAの選択的スプライシングがAMPK活性によって変化することも確認することができた。よって概ね順調に進展していると思われる。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後はAMPK活性によって、SRSF1タンパク質を介したmRNAの選択的スプライシングを網羅的に解析することでAMPKが選択的スプライシングに及ぼす影響を明らかにする。
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