2018 Fiscal Year Research-status Report
海産魚マサバをモデルとした生殖における魚類レプチンの機能解析
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17K15322
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
大賀 浩史 九州大学, 農学研究院, 助教 (60792299)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 初回成熟 / 栄養状態 / 生殖腺刺激ホルモン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
脂肪細胞より分泌されるレプチンは、食欲や代謝調節だけではなく、エネルギー貯蔵情報として脳-性腺軸の活性化にも深く関与する。レプチンは魚類において も同定されているが、レプチンによる性機能の制御機構が魚類にも存在するのか、未だ報告がない。本申請課題では、マサバを有用海産魚種のモデルとして、レ プチンが性腺軸の活性化に与える影響について、組換えホルモンの作製や細胞組織学的な解析をとおして明らかにする。
平成30年度は、1. マサバレプチン組換えホルモン(cm-rLepA)のラージスケールでの作製、2. 脳下垂体初代培養細胞を用いたin vitroバイオアッセイ 、3. レプチンの筋中への反復投与が生殖腺の発達に与える影響の評価、4. レプチンの脳室内への投与が生殖関連因子に与える影響の急性的評価を計画しており、以下の成果を得た。
大腸菌発現系を用いて十分量のcm-rLepAを得た。作製したcm-rLepAは哺乳類細胞に発現させたマサバレプチン受容体に対して、強いシグナル伝達能を示したことより、十分な生理的活性を有していることが示された。初回成熟過程の飼育マサバより脳下垂体細胞を定期的に採取し、レプチン添加によるin vitroバイオアッセイを行った後に培養上清を回収した。初回成熟前のマサバ雌個体にレプチンを反復投与した結果、生殖腺の発達を促進する効果が認められた。レプチンを脳室内に投与した結果、生殖関連因子の遺伝子発現量の増加が認められた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ラージスケールでの組換えレプチンの合成に成功し、筋中への反復投与による長期的な影響の評価および脳室内への投与による急性的な影響の評価を、予定通りに実施した。また、各種生殖ステージにおけるGTH放出に与える影響の評価をin vitroバイオアッセイにより行った。
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| Strategy for Future Research Activity |
レプチンの生体投与が各種生殖関連因子の遺伝子発現に与える影響を、定量的PCRにより測定する。また、血中のステロイドホルモン量をELISA法により測定する。in vitroバイオアッセイ により回収した培養上清中のGTH量の定量を行う。
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| Causes of Carryover |
組換えレプチンの合成が当初見込みよりも高収量となたため、試薬類の使用量が少なく済んだため。
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Research Products
(3 results)
