2019 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of a novel diagnostic marker for SLOS based on LC/ESI-MS/MS by ESI-enhanced deuterium labeling
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17K15435
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| Research Institution | Tokyo University of Science |
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Principal Investigator |
小川 祥二郎 東京理科大学, 薬学部薬学科, 講師 (30546271)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | LC/ESI-MS/MS / Cookson型誘導体化試薬 / 先天性代謝異常症 / Smith-Lemli-Opitz症候群 / ヒドロキシ-7-デヒドロコレステロール |
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| Outline of Annual Research Achievements |
研究期間最終年度では，実施計画の当該年度の計画に従い，Smith-Lemli-Opitz症候群 (SLOS) モデルラットから得られた血清に対して，前年度までに得られた4種のモノヒドロキシ-7-デヒドロコレステロール (4α-, 4β-, 24S-及び25-ヒドロキシ-7-デヒドロコレステロール) 標品と照らし合わせることで，生体試料中の存否の確認を行った．すなわちSLOSの新規診断マーカーとしてのモノヒドロキシ-7-デヒドロコレステロールの妥当性を評価した．SLOSモデルラットは7-デヒドロコレステロールレダクターゼ阻害剤であるAY9944を妊娠ラットに投与後，産まれた仔ラットに経時的に摂取させて調製した．分析の方法論にはLC/ESI-MS/MS (Waters社の質量分析計 Premier XEにLC-2695eクロマトグラフを接続した装置を使用)を用いた．7-デヒドロコレステロール骨格の共役ジエンに選択的に反応する，我々の開発したDAPTADを誘導体化試薬に用いた．なお，DAPTADにより誘導体化前と比較し，300倍の感度向上が達成された．SLOSモデルラット及びコントロールラットの血清それぞれ5 μLをアセトニトル50 μLで除タンパクのみの簡単な前処理の後，DAPTAD誘導体化し，血清1 μL相当分を装置に付した．SLOSモデルラットの血清中から, 4α-及び4β-ヒドロキシ体が明瞭に検出された．一方，24S-及び25-OH体はSLOSモデルラット及びコントロールラットの血清中からは検出されなかった．以上の結果から，7-デヒドロコレステロールの側鎖のヒドロキシ体よりも，ステロイドA環4位のヒドロキシ体がSLOSの診断マーカーとして期待されるという結果を得た．
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[Journal Article] Quantitative MALDI-MS/MS assay for serum cortisol through charged derivatization2020
Author(s)
3.M. Nakamura, M. Moritsuna, K. Yuda, S. Fujimura, Y. Sugiura, S. Shimma, K. Nishimoto, T. Nishikawa, M. Suematsu, S. Ogawa, T. Higashi
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Journal Title
J. Pharm. Biomed. Anal.
Volume: 178
Pages: -
DOI
Peer Reviewed
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