2018 Fiscal Year Annual Research Report
Development of recombinant toxoid vaccines targeting B-subunit against Shiga toxins
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17K15687
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| Research Institution | University of the Ryukyus |
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Principal Investigator |
玉城 志博 琉球大学, 熱帯生物圏研究センター, 助教 (00720822)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 志賀毒素 / EHEC / AB5型毒素 / トキソイドワクチン / 分子デザイン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究課題では、AB5型毒素の一つである志賀毒素（Stx）に対するヒト用トキソイドワクチンを構築する。Stxの１型（Stx1）および２型（Stx2）のB鎖（Stx1BおよびStx2B）を連結させることにより、一つのタンパク質性抗原でStx1およびStx2両方の毒素に対応できるトキソイドワクチンを開発する。
連結型ワクチン抗原（Stx1B-Stx2BおよびStx2B-Stx1B）において、連結する順番が異なるだけでStx1およびStx2毒素に対するワクチン機能に差があることが分かっている。そこで、この原因を検証するため、Stx1BおよびStx2B自体の５量体安定性について解析することにした。グルタルアルデヒドによる架橋効率や動的光散乱法（DLS）、示差走査熱量測定法（DSC）を用いて解析した結果、Stx2B５量体分子はStx1B５量体分子より分子的揺らぎが大きいことが示唆された。また、コイルドコイルタンパク質COMPを結束分子としてそれぞれのB鎖のC末端（StxB-COMP）またはN末端（COMP-StxB）に融合させた結果、B鎖のどの末端側にCOMPを融合させるかにより、B鎖５量体の安定性に大きな影響を与えることが分かった。
次に、AB5型毒素のB鎖多重連結型トキソイドワクチン開発を目指し、コレラ毒素（CT）のB鎖（CTB）とStxBを連結させたコンストラクト構築した（StxB-CTBおよびCTB-StxB）。これらコンストラクトをこれまでと同様に大腸菌で発現させ、その生化学的解析をした結果、StxB-StxB連結型と同じく、StxBおよびCTBの連結する順番が異なるだけで、それぞれの受容体であるGb3およびGM1に対する結合能が異なることが分かった。以上のことから、B鎖（多重）連結型ワクチン開発において、B鎖を連結させる順番が重要なファクターであることが示唆された。
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Research Products
(2 results)
