2017 Fiscal Year Research-status Report
Analysis of the diversity on virus assembly and budding
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17K15702
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Research Institution | Nagasaki University |
Principal Investigator |
浦田 秀造 長崎大学, 熱帯医学研究所, 助教 (20614449)
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Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2019-03-31
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Keywords | ウイルス粒子形成 |
Outline of Annual Research Achievements |
ラッサウイルス (LASV)を含むアレナウイルス科はヒト高病原性ウイルスを多数含み、それらは我が国では感染症法によってI種病原体等に指定されている。現在、世界的に認可されているアレナウイルスに対するワクチン・有効な治療薬はない。申請者はこれまでにアレナウイルス科の粒子産生機構の多様性を報告してきたが、本研究では①感染性のウイルス、②国内で扱うことができないウイルスに関してはウイルス”様”粒子 (VLP)、を用い、分子生物学的手法にて、アレナウイルス粒子形成 (集合)・出芽の分子機構を明らかとし、創薬の標的を同定することを目的とする。 本研究においては特に1. 低分子量Gタンパク質であるRab、2. ESCRT機構、の2つの宿主分子(機構)に焦点を絞り、そのウイルス粒子形成における重要性を明らかとする。 初年度の今年は、まず複数のRabタンパク質に対する抗体を購入し、293T細胞、Huh-7細胞での検出可能性を検討した。その後、遺伝子組換えリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス (rLCMV/Z-FLAG)感染におけるZタンパク質 (抗FLAG抗体による検出)、強制発現によるフニンウイルスZタンパク質、ルジョウイルスZタンパク質、タカリベウイルスZタンパク質、と各種Rabとの共局在を共焦点レーザー顕微鏡にて観察した。 その結果、これらのZタンパク質はRab11Aと共局在することが明らかとなった。 この結果を受けて、Rab11Aを含む複数のRabに対するsiRNAを設計し、そのタンパク質発現抑制効果を確認した。同時にESCRT機構のESCRT-III複合体の1因子であるCHMP4Bに対するsiRNAも設計し、そのタンパク質発現抑制効果も確認した。今後は、これらのsiRNA導入におけるウイルス(様)粒子産生の影響を確認していく。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本課題において、研究はおおむね順調に進展している。しかしながら、反応が期待された市販抗体が予想に反して反応しない、設計したsiRNAが期待通りに標的タンパク質の発現を抑制しない等、ある程度は予測範囲内ではあるものの、期待に沿わなかったことがあった。最終年度においては、更なる工夫を加えて、これらの点を改善していく。
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Strategy for Future Research Activity |
反応が認められなかった抗体や、機能が認められなかったsiRNAは検索や設計を行いなおす。また、機能が認められたsiRNAにおいてはウイルス様粒子産生、ウイルス複製に与える影響を随時検討していく。 その他、申請書に記載通りの実験計画を進めていく。
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