2017 Fiscal Year Research-status Report
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17K15768
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
石毛 崇之 千葉大学, 医学部附属病院, 臨床検査技師 (30757315)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 1α,25-dihydroxyvitamin D / LC/MS/MS / Immunoextraction |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ビタミンDは骨代謝や免疫調節に関連した様々な作用を持ち、その不足は乳幼児の骨疾患だけでなく、成人の免疫性疾患、悪性腫瘍などのリスクとも関連するため、代謝物を含めた精確な定量が必要である。ビタミンD代謝物は分子構造によってその生物学的活性が大きく異なり、代謝動態の正確な評価には精密定量法の構築が不可欠である。本研究ではビタミンD代謝物の精確な定量の為に、LC/MS/MS による高精度ビタミン D 代謝物分析法を構築することを目的とする。加えて、ビタミン D 代謝や生物学的活性にはビタミン D 結合蛋白質、ビタミン D 受容体、各種水酸化酵素などの遺伝子多型も密接に関与している為、これらビタミン D 代謝関連遺伝子の遺伝子多型解析を含めた包括的なビタミンD代謝動態の把握を目指す。本年度は、血清・血漿中の活性型ビタミンD[1α,25-dihydroxyvitamin D; 1,25(OH)2D]を定量するため、LC/MS/MSによる分析法の構築およびバリデーションを行なった。検体前処理法にimmunoextractionを用いることで、濃度の非常に低い1,25(OH)2Dを効果的に濃縮することができた。構築した方法について、採血管の違い、溶血・乳び・リウマチ因子、保存温度といった解析に影響を与える要因について検証を行ない、いずれも1,25(OH)2D分析には影響を与えないということを確認した。また、1,25(OH)2Dは従来法であるRIAではLC/MS/MSに比べて高値傾向を示し、抗体のみによる検出では交差反応によりその他のビタミンD代謝物を測り混んでいる可能性が示唆された。これらの結果について、英文誌（査読あり）に発表した（Clin Chim Acta. 2017; 473: 173-179）。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度の計画通り、LC/MS/MSによる1,25(OH)2Dの分析法を構築することができた。現在、次年度の計画である、ビタミンD代謝関連遺伝子の多型についてデータベースを用いて検索を行い、最初にビタミンD結合蛋白質(GC)の遺伝子多型解析を行っていく予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
ビタミン D 代謝関連遺伝子の多型解析方法の構築を行う。ビタミンD結合蛋白質(GC)には近接した箇所に2つの遺伝子多型が存在する。それらを同時にタイピングする為、融解曲線分析を用いたhigh-throughput genotypingの構築を検討している。
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[Journal Article] Surveillance evaluation of the standardization of assay values for serum total 25-hydroxyvitamin D concentration in Japan2018
Author(s)
Hiroshi Ihara, Sachiko Kiuchi, Takayuki Ishige, Motoi Nishimura, Kazuyuki Matsushita, Mamoru Satoh, Fumio Nomura, Mine Yamashita, Isao Kitajima, Naoko Tsugawa, Toshio Okano, Kouichi Hirota, Masakazu Miura, Masayuki Totani, Naotaka Hashizume; on behalf of the Nutrition Division, Japan Society of Clinical Chemistry
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Journal Title
Annals of Clinical Biochemistry
Volume: 印刷中
Pages: 印刷中
DOI
Peer Reviewed
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