Research for hepatocarcinogenesis and new therapeutic targets in hepatocellular carcinoma with or without HBV/HCV suppression

2018 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17K15932
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 北畑 富貴子 (河合) 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 特任助教 (00755580)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 肝細胞癌 / B型肝炎 / C型肝炎

Outline of Annual Research Achievements

研究代表者は 1. 肝炎ウイルス制御下における肝発癌・進展に関わるゲノムプロファイルの網羅的解析 2. HBV integrationをゲノム編集により導入したiPS細胞の樹立とこれを用いた癌形質獲得について細胞生物学的解析 3. HBx蛋白と宿主ゲノム異常及びHBV integrationとの相互関係の解析を行い本年度の実績として下記を得た。
1. 肝細胞癌患者由来検体204例の癌部と非癌部のDNAを用いてdeep sequenceを行い16遺伝子280か所の遺伝子変異を同定した。HBV既感染50例の癌部におけるHBV integrationは6例22か所で検出された。HBV integrationが検出された6例はHCV抗体陰性、若年で発症し6例中3例は正常肝からの発癌でありHBV持続感染と同様の発癌機序の可能性が考えられた。
2. 前項の検討で得られたHBx遺伝子とTERT locus breakpointsを再現してHBxコンセンサス配列を入れたコンストラクトを合成し薬剤選択遺伝子をloxP配列で除去しうる系を組み込んだtargeting vectorを作成した。Crispr/Cas9系を利用してヒトiPS細胞株のTERT promoter領域へHBx配列の組み込みを導入中である。
3. 野生型のTERT promoter配列に臨床検体で認められた2種類の変異を導入したレポータープラスミドを作成し、HepG2細胞および293T細胞へ遺伝子導入し、レポーターアッセイを行い、2種の細胞株でTERT promoter活性は変異型で上昇した。次に前述のプラスミドとHBx蛋白を発現するプラスミドを2種の細胞株へ遺伝子導入し、HBx発現によりTERT mRNA, 蛋白発現ともに上昇することを確認した。以上からHBxはTERT promoter活性上昇に関与することが示唆された。

Research Products

• [Journal Article] Impact of novel NS5A resistance-associated substitutions of hepatitis C virus detected in treatment-experienced patients (2019)
  • Author(s): Nitta Sayuri、Asahina Yasuhiro、Kato Takanobu、Tsuchiya Jun、Inoue-Shinomiya Emi、Sato Ayako、Tsunoda Tomoyuki、Miyoshi Masato、Kawai-Kitahata Fukiko、Murakawa Miyako、Itsui Yasuhiro、Nakagawa Mina、Azuma Seishin、Kakinuma Sei、Hikita Hayato、Takehara Tetsuo、Watanabe Mamoru
  • Journal Title: Scientific Reports Volume: 9 Pages: -
  • DOI: 10.1038/s41598-019-42114-z
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Loss of Fibrocystin Promotes Interleukin-8-Dependent Proliferation and CTGF Production of Biliary Epithelium (2019)
  • Author(s): Tsunoda T, Kakinuma S, Miyoshi M, Kamiya A, Kaneko S, Sato A, Tsuchiya J, Nitta S, Kawai-Kitahata F, Murakawa M, Itsui Y, Nakagawa M, Azuma S, Sogo T, Komatsu H, Mukouchi R, Inui A, Fujisawa T, Nakauchi H, Asahina Y, Watanabe M.
  • Journal Title: Journal of Hepatology Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • DOI: 10.1016/j.jhep.2019.02.024.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] LIM homeobox 2 promotes interaction between human iPS-derived hepatic progenitors and iPS-derived hepatic stellate-like cells (2019)
  • Author(s): Miyoshi Masato、Kakinuma Sei、Kamiya Akihide、Tsunoda Tomoyuki、Tsuchiya Jun、Sato Ayako、Kaneko Shun、Nitta Sayuri、Kawai-Kitahata Fukiko、Murakawa Miyako、Itsui Yasuhiro、Nakagawa Mina、Azuma Seishin、Nakauchi Hiromitsu、Asahina Yasuhiro、Watanabe Mamoru
  • Journal Title: Scientific Reports Volume: 9 Pages: -
  • DOI: 10.1038/s41598-018-37430-9
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Diabetic Retinopathy as a Risk Factor Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma in Nonalcoholic Fatty Liver Disease (2019)
  • Author(s): Azuma Seishin、Asahina Yasuhiro、Kakinuma Sei、Azuma Keiko、Miyoshi Masato、Inoue Emi、Tsunoda Tomoyuki、Sato Ayako、Kaneko Shun、Nagata Hiroko、Kawai-Kitahata Fukiko、Murakawa Miyako、Nitta Sayuri、Itsui Yasuhiro、Tomita Makoto、Nakagawa Mina、Watanabe Mamoru
  • Journal Title: Digestive Diseases Volume: 37 Pages: 247～254
  • DOI: 10.1159/000493580
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Association of serum interferon-λ3 levels with hepatocarcinogenesis in chronic hepatitis C patients treated with direct-acting antiviral agents (2019)
  • Author(s): Inoue-Shinomiya Emi、Murakawa Miyako、Asahina Yasuhiro、Nakagawa Mina、Tsuchiya Jun、Sato Ayako、Tsunoda Tomoyuki、Miyoshi Masato、Nitta Sayuri、Kawai-Kitahata Fukiko、Itsui Yasuhiro、Azuma Seishin、Kakinuma Sei、Murata Kazumoto、Mizokami Masashi、Watanabe Mamoru
  • Journal Title: Hepatology Research Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • DOI: 10.1111/hepr.13307
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Difference of gene mutational profile among viral- and non-viral HCC with or without prior HBV infection: Results of comprehensive deep sequencing analyses of cancer genes and HBV/AAV integration (2018)
  • Author(s): Fukiko Kawai-Kitahata, Yasuhiro Asahina, Sei Kakinuma, Miyako Murakawa, Sayuri Nitta, Hiroko Nagata, Shun Kaneko, Emi Inoue, Masato Miyoshi, Tomoyuki Tsunoda, Ayako Sato, Mina Nakagawa, Yasuhiro Itsui, Seishin Azuma, Shinji Tanaka, Minoru Tanabe, Shinya Maekawa, Nobuyuki Enomoto and Mamoru Watanabe
  • Organizer: EASL The International Liver Congress 2018
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 肝癌の臨床検体を用いた癌関連遺伝子プロファイルと病態の解析 (2018)
  • Author(s): 北畑富貴子、朝比奈靖浩、渡辺守
  • Organizer: 第104回日本消化器病学会総会
• [Presentation] 癌関連遺伝子変異とウイルスのヒトゲノム挿入から検討する肝炎ウイルス制御下肝細胞癌の病態 (2018)
  • Author(s): 北畑富貴子、朝比奈靖浩、渡辺守
  • Organizer: 第54回日本肝臓学会総会
• [Presentation] Gene mutational profile and viral integration in hepatocellular carcinoma with or without HBV/HCV suppression (2018)
  • Author(s): Yasuhiro Asahina, Fukiko Kawai-Kitahata, Sei Kakinuma, Miyako Murakawa, Sayuri Nitta, Hiroko Nagata, Shun Kaneko, Emi Inoue, Masato Miyoshi, Tomoyuki Tsunoda, Ayako Sato, Mina Nakagawa, Yasuhiro Itsui, Seishin Azuma, Shinji Tanaka, Minoru Tanabe, Shinya Maekawa, Nobuyuki Enomoto and Mamoru Watanabe
  • Organizer: The Liver Meeting 2018 AASLD
  • Int'l Joint Research