血管新生能が高いマウスで発現する細胞外microRNAを用いた血管新生治療法開発

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K16593
• Research Institution: Yamaguchi University
• Principal Investigator: 上野 耕司 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (30736070)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: microRNA / 血管新生

Outline of Annual Research Achievements

マウスの系統による血管新生能の違いに着目し、血管新生能の高いマウスに発現しているmicroRNAの中に血管新生能を有するmicroRNAが存在しているのではないかと考え、本研究は血管新生を誘導するmicroRNAを同定することを目指している。
血管新生能の高いマウスと血管新生能の低い2種類のマウスの系統を用いて、採血後に血液中のエクソソームを回収し、エクソソームに内包されているmicroRNAを抽出した。そして、1次スクリーニングとして、血管新生能の高いマウスと血管新生能の低い2種類のマウス由来のmicroRNAを用いて、microRNA microarray解析を行うことで、血管新生能が高いマウスのみで発現していたmicroRNA31個と、血管新生能が低いマウスに比べて、血管新生能が高いマウスにおいて20倍以上高く発現しているmicroRNA12個の合計43個を血管新生能を有するmicroRNA候補として同定した。
次に、その43個のmicroRNAを発現するベクターを作製して、293T細胞に43個のそれぞれのmicroRNAを発現するベクターとコントロールベクターを導入後72時間培養し、その44サンプルの培養上清中のエクソソームを回収した。その44サンプルのエクソソームを用いて、2次スクリーニングとして、in vitro血管新生能アッセイを行うことにより、43個のmicroRNAの中から特に血管新生能を有すると考えられるmicroRNAを14個に絞り込んだ。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

血管新生能が高いマウスから選んだmicroRNAの中に、in vitroの血管新生能アッセイで、高い血管新生を示すmicroRNAが複数あったことから、当初の目的である血管新生能が高いmicroRNAを見つけ出す方法が正しいことが示唆されたと判断できるため。

Strategy for Future Research Activity

in vitroの血管新生能アッセイにおいて高い血管新生を示したmicroRNAの中から、in vivoにおいて血管新生を有するmicroRNAを同定する実験を行う予定である。