2017 Fiscal Year Research-status Report

悪性高熱症の新規原因遺伝子の探索

Research Project

Project/Area Number	17K16733
Research Institution	Hiroshima University
Principal Investigator	野田祐子広島大学, 病院(医), 医科診療医 (00790065)
Project Period (FY)	2017-04-01 – 2020-03-31
Keywords	悪性高熱症 / リアノジン受容体 / ジヒドロピリジン受容体 / 次世代シークエンサー
Outline of Annual Research Achievements	悪性高熱症の原因遺伝子としてリアノジン受容体(RYR1)やジヒドロピリジン受容体(CACNA1S)が挙げられるが，悪性高熱症素因者のうちRYR1に遺伝子変異が見つかる症例は約70%程度(1)で，CACNA1Sに遺伝子変異が見つかる症例は約1%程度(2）である．残りの30%前後の症例では原因遺伝子は現状では分からないが，これまでに発表されていない新規の遺伝子がまだいくつかあり，発症に寄与していると思われる．今回，悪性高熱症素因を持つ可能性の高い患者(悪性高熱症の発症者，家族，類縁疾患の患者)の血液等からDNAを抽出し，RYR1とCACNA1Sに変異を持つか次世代シークエンサーを用いてスクリーンングを行い，既知の変異を持たず，新規の遺伝子変異を持つ可能性が高いと思われるサンプルについてexome sequenceを施行し新規の遺伝子変異の探索を行った. 参考文献１．Ibarra M CA. Malignant hyperthermia in Japan: mutation screening of the entire ryanodine receptor type 1 gene coding region by direct sequencing. Anesthesiology. 2006 Jun; 104(6):1146-54. ２．Stewart SL. Identification of the Arg1086His mutation in the alpha subunit of the voltage-dependent calcium channel (CACNA1S) in a North American family with malignant hyperthermia. Clin Genet. 2001 Mar; 59(3):178-84.
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason これまでに，143サンプルについてDNAを抽出してスクリーニングを行い，RYR1とCACNA1Sに16種類の既知の変異(RYR1：T84M,Q155K,R163C,G341R,R533H,R614L,P1592L,V2280I,R2336H,S2345R,P2366R,R2508C,R2508H,L4838V,I4898T,CACNA1SR174W)や，17種類の新規の原因遺伝子の可能性のある変異(RYR1: D167G,E176D,R367Q,S604P,S2345T,I2358T,R2454G,R2625C,E3104K,N3913D,K4477N,A5025G,38990285_38990287delGGA,CACNA1S:D1382V,F1161L,S879P,A560T)を認めた．
Strategy for Future Research Activity	RYR1やCACNA1Sに認めた新規の原因遺伝子の可能性のある変異については，今後機能解析を行い原因遺伝子か否かの確認を行う予定としている．RYR1とCACNA1Sに悪性高熱症の原因遺伝子となりそうな変異を認めなかったサンプルについては，新規の原因遺伝子を持つ可能性が高いものをexome sequenceに提出し，新規の原因遺伝子の探索を試みる．7サンプル提出した現段階では，新規の原因遺伝子の特定には至っていないが，今後サンプルを追加でexome sequenceに提出して解析を行うことにより，原因遺伝子が特定できる可能性も高くなる．
Causes of Carryover	臨床業務が忙しくなり，本来実験に費やす時間が当初よりも削減されたため，その分だけ消耗品を購入しなかった.本年度は，実験に費やす時間をより多く確保するため，実験に使用する薬品や消耗品，機材を購入する予定である. 得られた成果を学会発表と論文報告する.