Establishment of the DNAJB8 targeting dendritic cell immunotherapy induced from iPS cells

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K16811
• Research Institution: Wakayama Medical University
• Principal Investigator: 西澤 哲 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (90458076)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: DNAJB8 / 癌幹細胞 / 免疫療法

Outline of Annual Research Achievements

マウスiPS細胞由来樹状細胞を誘導するために胎仔Balb/cマウス由来線維芽細胞株balb/3T3にセンダイウイルスベクターを用いてSox2, Oct3/4, Klf4, L-mycを遺伝子導入し、MMC処理したSNL-feeder細胞上でiPS細胞を誘導した。Colonyを形成した細胞集団をpick upし、2i-LIF mediumで培養しiPS細胞を継代維持した。樹立したiPS細胞については幹細胞マーカーとしてSox2, Oct3/4, Nanog, Ssea1の発現をRT-PCRで確認した。Dnajb8強制発現iPS細胞を得るためにDnajb8を強制発現したbalb/3T3細胞（balb3T3/DNAJB8）をDNAJB8 cDNAを含むレトロウイルスベクターを用いて遺伝子導入し、puromysinで選択して強制発現株を樹立した。Dnajb8の発現はRT-PCR、western blotで確認した。樹立したbalb3T3/DNAJB8に前述と同様にSox2, Oct3/4, Klf4, L-mycを遺伝子導入し、DNAJB8を強制発現するbalb/cマウス由来iPS細胞を作成し、幹細胞マーカーの発現をRT-PCRで確認した。Dnajb8 mRNAの発現についてもRT-PCRを用いて誘導したiPS細胞について確認したが、Dnajb8を強制発現しないiPS細胞にも幹細胞マーカーとしてのDnajb8の発現を認めたが、Dnajb8強制発現iPS細胞株についてはベクター特異的なプライマーを用いて遺伝子導入したDnajb8が強制発現していることを確認した。強制発現Dnajb8は分化しても消失しないため、今後、Senjuらの報告と同様に樹状細胞への分化誘導を行い、Dnajb8発現iPS細胞由来樹状細胞を誘導し、まずはin vitroの免疫実験を進める予定である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

誘導したiPS細胞から樹状細胞への誘導がうまくいっていない。

Strategy for Future Research Activity

Balb/cマウス由来iPS細胞から樹状細胞を誘導する方法は過去に報告のあるC57/BL6マウスとは異なる可能性があり、誘導条件を検討していく必要がある。誘導不可能な場合はC57/BL6マウスで実験をやり直す、

Causes of Carryover

予想された研究計画と成果に差異が生じたため、研究計画を修正しています。

Research Products

• [Journal Article] Identification of antigenic peptides from novel renal cancer stem-like cell antigen, DNAJB8. (2017)
  • Author(s): Nishizawa S, Hirohashi Y, Kusumoto H, Wakamiya T, Iguchi T, Yamashita S, Iba A, Kikkawa K, Kohjimoto Y, Torigoe T, Hara I.
  • Journal Title: Biochemical Biophysical Research Communication Volume: 494 Pages: 693-699
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2017.10.146.
  • Peer Reviewed