Establishment of the DNAJB8 targeting dendritic cell immunotherapy induced from iPS cells

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K16811
• Research Institution: Wakayama Medical University
• Principal Investigator: 西澤 哲 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (90458076)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: DNAJB8 / iPS細胞 / 樹状細胞

Outline of Annual Research Achievements

マウスiPS細胞由来樹状細胞を誘導するために胎仔Balb/cマウス由来線維芽細胞株balb/3T3にセンダイウイルスベクターを用いてSox2, Oct3/4, Klf4, L-mycを遺伝子導入し、MMC処理したSNL-feeder細胞上でiPS細胞を誘導した。Colonyを形成した細胞集団をpick upし、2i-LIF mediumで培養しiPS細胞を継代維持した。樹立したiPS細胞については幹細胞マーカーとしてSox2, Oct3/4, Nanog, Ssea1の発現をRT-PCRで確認した。Dnajb8強制発現iPS細胞を得るためにDnajb8を強制発現したbalb/3T3細胞（balb3T3/DNAJB8）をDNAJB8 cDNAを含むレトロウイルスベクターを用いて遺伝子導入し、puromysinで選択して強制発現株を樹立した。Dnajb8
の発現はRT-PCR、western blotで確認した。樹立したbalb3T3/DNAJB8に前述と同様にSox2, Oct3/4, Klf4, L-mycを遺伝子導入し、DNAJB8を強制発現するbalb/cマウス由来iPS細胞を作成し、幹細胞マーカーの発現をRT-PCRで確認した。Dnajb8 mRNAの発現についてもRT-PCRを用いて誘導したiPS細胞について確認したが、Dnajb8を強制発現しないiPS細胞にも幹細胞マーカーとしてのDnajb8の発現を認めたが、Dnajb8強制発現iPS細胞株についてはベクター特異的なプライマーを用いて遺伝子導入したDnajb8が強制発現していることを確認した。続いてDnajb8強制発現株についてSenjuらの報告に従い樹状細胞への分化誘導を複数回試みたが、FACSによるMHC classII,CD80,CD86,の発現を認めず、再検証が必要である。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

樹立したiPS細胞から樹状細胞への分化誘導ができない。iPS細胞の多分化能の再評価と誘導方法の再検証について検討中である。

Strategy for Future Research Activity

多分化能を有しているiPS細胞が誘導されているかの検証を行い、誘導されていない場合は再度、方法を検討して再誘導を試みる。誘導されている場合は樹状細胞への誘導方法を再検証する。樹状細胞の誘導が達成されれば、in vivoの免疫実験に移行する予定である。

Causes of Carryover

予想された研究計画と成果に差異が生じたため、研究計画を修正しています。