2019 Fiscal Year Annual Research Report
Establishment of the DNAJB8 targeting dendritic cell immunotherapy induced from iPS cells
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17K16811
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
西澤 哲 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (90458076)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | Dnajb8 / iPS細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マウスiPS細胞由来樹状細胞を誘導するために胎仔Balb/cマウス由来線維芽細胞株balb/3T3にセンダイウイルスベクターを用いてSox2, Oct3/4, Klf4, L-mycを遺伝子導入し、MMC処理したSNL-feeder細胞上でiPS細胞を誘導した。Colonyを形成した細胞集団をpick upし、2i-LIF mediumで培養しiPS細胞を継代維持した。樹立したiPS細胞については幹細胞マーカーとしてSox2, Oct3/4, Nanog, Ssea1の発現をRT-PCRで確認した。Dnajb8強制発現iPS細胞を得るためにDnajb8を強制発現したbalb/3T3細胞（balb3T3/DNAJB8）をDNAJB8 cDNAを含むレトロウイルスベクターを用いて遺伝子導入し、puromysinで選択して強制発現株を樹立した。Dnajb8の発現はRT-PCR、western blotで確認した。樹立したbalb3T3/DNAJB8に前述と同様にSox2, Oct3/4, Klf4, L-mycを遺伝子導入し、DNAJB8を強制発現するbalb/cマウス由来iPS細胞を作成し、幹細胞マーカーの発現をRT-PCRで確認した。Dnajb8 mRNAの発現についてもRT-PCRを用いて誘導したiPS細胞について確認したが、Dnajb8を強制発現しないiPS細胞にも幹細胞マーカーとしてのDnajb8の発現を認めたが、Dnajb8強制発現iPS細胞株についてはベクター特異的なプライマーを用いて遺伝子導入したDnajb8が強制発現していることを確認した。強制発現Dnajb8は分化しても消失しないため、Dnajb8を強制発現したiPS細胞由来樹状細胞の分化誘導をSenjuらの報告に従い行ったが、樹状細胞への分化誘導の確認はできず、今後、手法を再検討して誘導方法を確立していく予定である。
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